[发明专利]副溶血性弧菌多重定量PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供了一种副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)、不耐热溶血素基因(tlh)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)和耐热相关溶血素基因(trh)的特异性引物和探针组成。本发明针对副溶血弧菌毒素基因提供了一种快速、敏感、特异的多重荧光定量PCR检测试剂盒和检测方法，为及时控制副溶血性弧菌食物中毒及其早期诊断提供了基础。

主权项

一种副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)、不耐热溶血素基因(tlh)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)和耐热相关溶血素基因(trh)的特异性引物和探针组成：tdh上游引物：5′‑TCTGCTTTTGAGCTTCCATCTGT‑3′；tdh下游引物：5′‑TGACCGGAGCTTGGGTATTAA‑3′；tdh荧光探针：5′‑FAM‑CCTGCCCCCGGTTCTGATGAGATATT‑BHQ1‑3′；tlh上游引物：5′‑CCAGAAGAGCACGGTTTC‑3′；tlh下游引物：5′‑GGTGTACATGTAATCGACAGACGAT‑3′；tlh荧光探针：5′‑VIC‑CGATCCTTGTTTGGACATCAACCGCT‑BHQ1‑3′；toxR上游引物：5′‑TTCCGTCAGATTGGTGAGTATCAG‑3′；toxR下游引物：5′‑TGCTCAATAGAAGGCAACCAGTT‑3′；toxR荧光探针：5′‑ROX‑TGATGACACCTGTAAATCACCCGCAAATC‑BHQ2‑3′；trh上游引物：5′‑TGCTATTGGCTTCGATATTTTCAGTA‑3′；trh下游引物：5′‑CGAACCTGGAGAAGGAAAAGGT‑3′；trh荧光探针：5′‑CY5‑CTAAATCATTCGCGATTGACCTGCCATC‑BHQ2‑3′；其中FAM、VIC、ROX和CY5为不同波长的荧光报告基团，BHQl 和BHQ2为荧光淬灭基团。