[发明专利]抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的测定方法

摘要

本发明涉及一种抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的测定方法，该方法首先对样品进行预处理，除去了大分子物质，再用异硫氰酸苯酯对甘氨酸进行柱前衍生化处理，配制衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液，然后进行反相高效液相色谱法分析（RP-HPLC）。本发明能准确，快速、简便测定出抗毒素/抗血清中甘氨酸的含量，从而评价制品质量。

主权项

一种抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的测定方法，包括分别吸取衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液，采用常规高效液相色谱法进行测定，再按常规方法测定甘氨酸和正缬氨酸的峰面积，以内标法计算，即得到抗毒素/抗血清中甘氨酸的含量，其特征在于所述衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液的制备经过下列各步骤：（1）将内标物用水溶解，制成浓度为3～5mg/mL的内标物溶液；（2）将对照品甘氨酸用水溶解，制成浓度为20～30mg/mL的对照品贮备液；在1.0mL对照品贮备液中加入9.0mL质量浓度为1.5%的磺基水杨酸，混匀后至少静置2小时，在3000转/分的转速下离心分离10min，取分离后的上清液0.4mL，用水稀释至10mL，即得到对照品溶液；（3）取供试品抗毒素、抗血清1.0mL，向其中加入9.0mL质量浓度为1.5%的磺基水杨酸，混匀后至少静置2小时，在3000转/分的转速下离心分离10min，取分离后的上清液1.0mL，用水稀释至10mL，即得到供试品溶液；（4）分别取步骤（2）所得对照品溶液和步骤（3）所得供试品溶液各0.4mL，在各溶液中分别加水1.6mL，再分别加步骤（1）所得内标物溶液0.08mL，涡旋混合15s，再分别加入1.0mL含三乙胺的乙腈溶液，三乙胺的浓度为1mol/L，混匀，接着分别加入1.0mL含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液，异硫氰酸苯酯的浓度为0.1mol/L，涡旋混合30s，室温放置1小时，最后分别加入正己烷4mL，振摇后放置10min，取下层溶液进行过滤，滤液即为衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液。