[发明专利]人LOX-1细胞外结构域的高效可溶性表达及纯化方法无效
| 申请号： | 201210044888.X | 申请日： | 2012-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN102604980A | 公开（公告）日： | 2012-07-25 |
| 发明（设计）人： | 相宏宇;谢秋宏;孟兆丽;张海辉;张欣冉;谢彦博 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/12;C07K14/705;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明公开一种人LOX-1细胞外结构域的高效可溶性表达及纯化方法，涉及在大肠杆菌中高效可溶性表达人LOX-1细胞外结构域(hLOX-1ECD)的表达载体的构建、高效可溶性表达条件的确立及规模化大量纯化工艺的建立，可用于hLOX-1ECD的大量制备，本发明纯化过程简便易行，可实现大量制备，并且纯化的hLOX-1ECD蛋白纯度高。 | ||
| 搜索关键词： | lox 细胞 结构 高效 可溶性 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种人LOX‑1细胞外结构域的高效可溶性表达方法，包括以下步骤：（1）表达载体的构建表达载体中使用麦芽糖结合蛋白(MBP)作为融合标签；根据目的蛋白的二级结构及其pI值的特性在目的蛋白N末端添加蛋白酶酶切位点；采用gateway连接技术构建表达质粒；（2）表达条件的优化使用大肠杆菌Rosetta‑gami2(DE3)作为表达宿主细胞；通过培养条件及IPTG浓度变化控制表达速度；（3）hLOX‑1 ECD蛋白的纯化利用MBPTrap HP回收融合蛋白，通过蛋白酶酶切除去融合蛋白中的MBP标签，分子筛、离子交换层析等交替使用得到在SDS‑PAGE上为单一条带的高纯度hLOX‑1 ECD蛋白。
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