[发明专利]一种测定水中叶绿素a的方法

摘要

一种测定水中叶绿素a的方法，涉及一种测定水中叶绿素a的方法。是要解决现有的乙醇冷冻法测定叶绿素a的方法需要盐酸酸化，盐酸使用量不好控制，导致测定稳定性差、重现性差的问题。方法：取水样进行过滤，将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入乙醇溶液中，冷藏后离心，收集上清液，再补加乙醇溶液，离心，收集上清液，合并上清液，加入乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；将萃取液离心，得萃取液上清液，测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值，计算水体中叶绿素a的含量。本发明无需研磨，可大大节省人力，并避免因转移萃取液而造成的叶绿素损失；不受盐酸酸化程度的影响；提取更完全，结果重现性好。

主权项

一种测定水中叶绿素a的方法，其特征在于测定水中叶绿素a的方法，按以下步骤进行：一、取50～200ml水样，采用0.45μm醋酸纤维滤膜进行过滤，真空泵压力控制在0.05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜；二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积浓度为90％的乙醇溶液的离心管中，置于4℃冷藏12～24h；三、然后将离心管于8000r/min离心15min，收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90％的乙醇溶液，再于8000r/min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90％的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；四、将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为90％的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值，按以下公式计算水体中叶绿素a的含量：Chla＝[12.12(D664‑D750)‑1.58(D647‑D750)‑0.08(D630‑D750)]Ve/V；其中Chla为水样中叶绿素a的含量，μg/L；D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值；Ve为萃取液的总体积，ml；V为抽滤的水样体积，L。