[发明专利]一种从里氏木霉中分离多糖水解酶的方法无效
| 申请号： | 201210052751.9 | 申请日： | 2012-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN103255117A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 刘爱骅;祁环;梁波;白罚利 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李颖 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及蛋白纯化技术，具体的说是一种从里氏木霉中分离多糖水解酶的方法。将里氏木霉粗酶制剂溶解于20mM Tris-HCl，pH7.0缓冲液中，以0.5M NaCl在0.8-1.2mL/min的流速下进行Mono QTM5/50GL阴离子交换柱梯度洗脱，在线紫外监测蛋白，根据紫外吸收峰分别收集11.5-65.5min，70.5-75.7min，75.7-81.0min，81.0-102.5min对应的洗脱组份，即为多糖水解酶；所述多糖水解酶进一步的纯化得到外切葡聚糖酶II(CBH II)、内切葡聚糖酶II(EG II)、木聚糖酶、内切葡聚糖酶I(EG I)、β-木糖苷酶、β-葡萄糖苷酶(BGL)和外切葡聚糖酶I(CBH I)。本发明从粗酶混合物中分离多种单一酶组份方法简便，且得到较多水解酶组份，所纯化得到的七种单一酶组份均保持有活性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 里氏 木霉中 分离 多糖 水解 方法 | ||
【主权项】：
一种从里氏木霉中分离多糖水解酶的方法，其特征在于：将里氏木霉粗酶制剂溶解于20mM Tris‑HCl，pH7.0缓冲液中，以0.5M NaCl在0.8‑1.2mL/min的流速下，使用Mono QTM5/50GL阴离子交换柱进行梯度分离，根据紫外吸收峰分别收集11.5‑65.5min，70.5‑75.7min，75.7‑81.0min，81.0‑102.5min对应的洗脱组份，即为多糖水解酶，并分别将上述收集组分进一步的纯化，将根据紫外吸收峰收集11.5‑65.5min组分冻干后，溶于0.5‑1mL超纯水中，以0.9‑1.1mL/min的流速，使用凝胶过滤柱Superdex 75pg层析，收集51.5‑55.5min对应的洗脱组份，即为外切葡聚糖酶II(CBH II)；收集58.5‑63.5min对应的洗脱组份，即为内切葡聚糖酶II(EG II)；将根据紫外吸收峰收集70.5‑75.7min组分冻干后，溶于0.5‑1mL超纯水中，以0.9‑1.1mL/min的流速，使用凝胶过滤柱Superdex 75pg层析，收集47.5‑51.0min对应的洗脱组份，即为木聚糖酶；收集53.0‑61.5min对应的洗脱组份，即为内切葡聚糖酶I(EG I)；将根据紫外吸收峰收集75.7‑81.0min冻干后，溶于0.5‑1mL超纯水中，以0.9‑1.1mL/min的流速，使用凝胶过滤柱Superdex 200pg层析，收集68.5‑74.5min对应的洗脱组份，即为β‑木糖苷酶；收集77.0‑82.5min对应的洗脱组份，即为β‑葡萄糖苷酶(BGL)；将根据紫外吸收峰收集81.0‑102.5min冻干后，溶于0.5‑1mL超纯水中，以0.9‑1.1mL/min的流速，使用凝胶过滤柱Superdex 75pg层析，收集52.5‑62.5min对应的洗脱组份，即为外切葡聚糖酶I(CBH I)。
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