[发明专利]简易的低聚木糖平均聚合度的测定方法

摘要

本发明公开了一种简易的低聚木糖平均聚合度的测定方法，通过低聚木糖溶液中总糖浓度和还原糖浓度测定低聚木糖在水溶液中的整体聚合度N，从而能对低聚木糖品质有个宏观的判定；当N=1则溶液中全为木糖，当N数值偏小则可以判定溶液中低聚木糖组分中聚合较小的组分含量较高；该测定方法对仪器要求不高，简单易于操作，在分离纯化过程中N的变换能反映出各个组分在溶液中的变化情况，通过测定平均聚合度这一宏观指标来直观的反应低聚木糖品质。

主权项

简易的低聚木糖平均聚合度的测定方法，其特征在于该测定方法包括以下步骤：（1） 标准样品测定低聚木糖液的总糖浓度：采用苯酚‑浓硫酸法，苯酚‑浓硫酸法测定步骤及标准曲线制备如下：⑴  标准木糖溶液的配制：先制备1mol/L的标准木糖液，再分别稀释到200、180、150、100、60、50、30、20、10 uM/L的木糖液；⑵  制备标准曲线：9支试管分别移取1ml的200、180、150、100、60、50、30、20、10 uM/L的木糖液，加入25ul的质量浓度80%的苯酚，迅速加入2.5ml的浓硫酸摇匀，静置10min，再置于25‑30℃的恒温水池10‑20min，取出冷却，在480nm测其吸光值；（2） 标准样品还原糖浓度的测定：采用DNS法或BCA法，其中DNS法适用于糖浓度相对较高的溶液，测量范围在200‑5000mg/L；而BCA法适合测量糖浓度低的糖溶液，测量范围在0.4‑9mg/L；DNS法测定步骤及标准曲线制备如下：⑴  配制DNS试剂：将10.6g 的3，5‑二硝基水杨酸和19.8g氢氧化钠溶于1416ml的蒸馏水中，完全溶解后加入360g的酒石酸钾钠、7.6ml的苯酚和8.3g的亚硫酸钠，50℃溶解混匀，同时确保该溶液为碱性；⑵  配制标准木糖溶液：先配置1mol/L的木糖溶液，再稀释到25、20、18、15、12、10、5、2mM/L的木糖液；⑶  制备标准曲线：取8支试管分别移取1ml的25、20、18、15、12、10、5、2 mM/L的木糖溶液和1ml的蒸馏水，加入3mLDNS试剂于沸水浴显色5min，冰水浴冷却，取出至常温，吸取200ul的糖液放入2.5ml的蒸馏水于比色皿中，测定540nm的吸光值并绘制标准曲线；BCA法测定步骤及标准曲线制备如下：⑴ 配制A液：分别称取0.971g 2’2‑联喹啉‑4’4‑二羧酸钠、27.14g碳酸钠和12.1g碳酸氢钠溶于500ml蒸馏水中，加热溶解；⑵ 配制B液：分别称取0.624g的硫酸铜、0.631g的L‑serine于500ml蒸馏水中；⑶ 配制标准木糖溶液：先配制1mol/L的木糖溶液，再最终稀释到 60、50、40、30、15、10、5 uM各5ml；⑷ 制备标准曲线：7支试管内分别取1ml A液和1ml B液混合均匀，再加入2ml标准木糖溶液摇匀，在75℃保存30min，室温冷却之后在560nm下测吸光值并绘制标准曲线；（3）样品的测定：把样品溶液稀释到标准曲线线性范围之中，采用同标准样品测定相同的步骤进行样品的测定，得到总糖浓度和还原端糖浓度；（4）平均聚合度的计算：将步骤（3）得到的总糖浓度和还原端糖浓度采用公式计算得平均聚合度，公式为：平均聚合度=总糖浓度/还原端糖浓度；（5 ）利用平均聚合度对低聚木糖水溶液判定：低聚木糖是指2~7 个D‑木糖以β‑1 ,4‑木糖苷键结合而成的寡聚木聚糖，1mol低聚木糖分解成木糖的范围为2~7mol，平均聚合度的数值范围应该为1~7；当平均聚合度数值为1时，则说明溶液中的糖溶液为木糖溶液；1＜N＜2时，说明低聚木糖中有木糖混在其中；2＜N＜7时，数值越大则说明低聚木糖的聚合度越高；数值超过7时，则说明溶液中非低聚木糖含量较大。