[发明专利]复合微生物发酵牧草饲料的制备方法

摘要

本发明提供了一种复合微生物发酵牧草饲料的制备方法。首先制备康宁木霉CICC13037、胶红酵母CICC 31192、枯草芽孢杆菌CICC 10063、枯草芽孢杆菌CICC 10089四株菌的复合微生物发酵剂冻干粉，经2％的葡萄糖溶液活化后接种于鲜牧草段中，再经保温发酵、通风干燥后，包装即为成品。

主权项

复合微生物发酵牧草饲料的制备方法，其特征在于按以下方法制备：1).发酵菌株的选择及培养基的制备A菌——康宁木霉Trichoderma koningii，菌株编号：CICC 13037，培养基为：麸皮～马铃薯滤液100毫升蔗糖2克，PH 6，麸皮～马铃薯滤液的制备方法：5克麸皮和20克马铃薯加100毫升水煮沸过滤，蒸馏水补足至100毫升。B菌——胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa，菌株编号：CICC 31192，培养基为：5°Bé麦芽汁琼脂。C菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10063，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。D菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10089，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。2).原菌种活化分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。3).母发酵剂的制备分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2)步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。4).生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40‑42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml。5).粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入‑30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。6).复合微生物发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2‑3份，B菌粉末3‑5份，C菌粉末2‑4份，D菌粉末2‑3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉。7).牧草预处理将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm‑1cm的牧草段。8).复合微生物发酵剂冻干粉活化首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃‑30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。9).发酵将经过8)步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过7)步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm‑50cm，25℃‑30℃条件下静止发酵48小时。10).干燥将经过9)步骤发酵处理的牧草在40℃‑45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，停止干燥，然后包装即为成品。