[发明专利]基于流式细胞术快速定量检测淡水环境中总病毒的方法

摘要

一种基于流式细胞术快速定量检测淡水环境中总病毒的方法，属于生物技术和水环境监测领域。该方法包括过膜、固定、保存、染色、稀释、检测共六个主要步骤。具体操作过程如下：将采集到的水样过0.22μm的滤膜后；加入戊二醛4℃固定15min后经液氮冷冻；保存于–80℃冰箱；检测前加入Na2EDTA以及荧光染料SYBRGreenI于80℃避光染色10min；待样品降至室温后用Milli-Q水稀释；上流式细胞仪进行检测。本发明方法避免了现有淡水总病毒测定方法耗时费力的问题，实现了淡水病毒的快速定量测定，在淡水病毒检测及水生生态学研究等领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于流式细胞术快速定量检测淡水环境中总病毒的方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：第1、水样过孔径为0.22μm的滤膜后加入戊二醛，使戊二醛的最终质量浓度为0.25％，并立即放入4℃冰箱；固定15min后用液氮冷冻并放置于‑80℃的冷藏室中保存；第2、检测前将第1步保存的水样置于室温下解冻；加入Na2EDTA使最终浓度达到5mmol/l，随后加入荧光染料SYBR Green I储备液；第3、将第2步处理后的水样于80℃避光染色10min，待冷却至室温后上流式细胞仪检测，水样测试前用Milli‑Q水稀释至流式细胞仪检测浓度小于2×105counts/ml。