[发明专利]玉蝉花的纳米组织培养方法

摘要

本发明公开了一种玉蝉花的纳米组织培养方法，主要通过组织培养过程中初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养添加了纳米助剂，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，玉蝉花的愈伤组织的萌动率达到了98%，增殖倍数达到了4.55倍，生根率达到了100%，而移栽成活率达到了98%。

主权项

一种玉蝉花的纳米组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤：（1）外植体的选择：在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；（2）材料处理方法：先用无菌水将外植体冲洗干净，去除叶鞘，切成具有1‑4个腋芽、长3‑5cm段，用0.5g/L的多菌灵溶液浸泡2‑3个小时，紫外灯照射20 min，再用75%乙醇消毒30秒钟，用0.1%升汞水浸泡20分钟，无菌水冲洗5‑6次，取出材料，切成具有一个腋芽、长度为1cm左右的小段，最后用12%次氯酸钠杀菌30秒，无菌水冲洗5‑6次；（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了3.0mg/L的6‑BA、1.2mg/L的NAA, 30mg/L的蔗糖，5mg/mL‑20mg/mL纳米助剂，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2200lux，待培养出的外植体带芽量长至3个时，即开始下一个阶段；所述的纳米助剂的制备方法为：将海泡石、蒙脱石粘土混合溶液在0℃下搅拌活化 2 h，加入十二烷基硫酸钠，3×104 r／min高剪切3 h，反应溶液冷却至室温后减压抽滤，所得沉淀在105℃下干燥至恒重，得到纳米助剂；（5）生根培养：将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了0.7mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA，0.2mg/L的GA，28mg/L的蔗糖，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2200lux，待新苗长至2.3cm左右时，即开始下一个阶段；（6）炼苗移栽：将长高至10‑15cm、长根≥５根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1‑3天后打开瓶盖，在25‑28℃，湿度70‑80％，光强７100‑7900lx条件下炼苗3‑5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩=3∶2∶2 的混合基质中，温度控制在28℃，前5d 湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。