[发明专利]基于Taqman探针的水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR快速检测方法

摘要

本发明公开了一种基于Taqman探针的麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)的荧光定量PCR快速检测方法，采用麦氏弧菌特异性引物和TaqMan探针，即可对水产品中麦氏弧菌进行检测与监控。其中上游引物Vmetschnikovii-1：5′-GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC-3′，下游引物Vmetschnikovii-2：5′-CCAAGATGGTCGATATCATC-3′，特异性TaqMan探针为：Vmetschnikovii-3：5′-CGTAGGTCGTATGAAGTTCAATAGT-3′。检测麦氏弧菌的方法包括细菌基因组DNA的提取、麦氏弧菌的荧光定量PCR检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高。另外，本发明与普通PCR技术相比，不需要凝胶电泳拍照观察，实现了检测流程一体化封闭检测，避免了PCR产物对实验室的污染。

主权项

一种基于Taqman探针的快速检测水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取TCBS平板上的可疑菌落的基因组DNA并稀释备用；再利用麦氏弧菌保守性强的基因组DNA序列设计特异性引物和探针；最后使用该引物和探针对待测水产品TCBS平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和荧光信号的检测。其中所述的麦氏弧菌特异性引物为：上游引物Vmetschnikovii‑1：5′‑GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC‑3′下游引物Vmetschnikovii‑2：5′‑CCAAGATGGTCGATATCATC‑3′特异性TaqMan探针为：Vmetschnikovii‑3：5′‑CGTAGGTCGTATGAAGTTCAATAGT‑3′