[发明专利]一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法

摘要

本发明涉及一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法，是根据蛋白酶催化蛋白质水解的原理，用含有蛋白质的脱脂奶粉（蛋白质含量50%～60%）作为底物。将待测样品定量地滴加在含有一定浓度蛋白质的固化底物上，在27～37℃温度条件下孵育，观察小孔周围是否能形成透明圈，如果有，说明样品中含有蛋白酶；如果没有，则说明样品中不含有蛋白酶。本发明提供的检测方法灵敏度高，样品前处理简单、用量少，可操作性强，实验环境要求低、成本低，适合各类实验室及不同规模啤酒企业的推广应用。

主权项

一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）每100 mL去离子水或蒸馏水中加入1‑‑2g脱脂奶粉和1‑2g琼脂混合均匀配制成上层固化物；每100 mL去离子水或蒸馏水中加入1‑‑2g琼脂混合均匀配制成下层固化物；将上述上层固化底物和下层固化物分别装入容器密封，116℃灭菌15min，45℃保温，以防止底物固化； 2 ）在一密闭容器底部事先垂直放置好可以形成孔洞的物体，该物体高度需大于0.3‑0.5 cm；孔洞容积为0.1~0.5mL；孔洞高度为0.3‑0.5 cm，是两层固化底物的厚度；孔洞间隔距离不小于1.5cm；密封，116℃灭菌15min；3）将步骤1中灭菌后的下层固化底物及上层固化底物倒入步骤2所述的密闭容器中：先倒入下层琼脂固化物，待下层固化物凝固之后倒入上层固化底物；所述倒入的下层固化物及上层固化底物的厚度相等，均为0.15~0.25cm，下层固化物的目的是增加孔洞容积；待两层固化物凝固后，用灭菌的镊子将用于形成孔洞的物体夹出，此时固化底物上会留有孔洞，以滴加样品使用；4 ）将待测啤酒样品滴加入步骤3形成的孔洞中，密封容器，以防止水分蒸发、避免杂菌污染；5）将上述密封容器于27~37℃温度环境中孵育24~168h后取出，观察孔洞表面周围是否形成透明圈，若存在，则说明样品中含有蛋白酶；若没有，则说明样品中不含有蛋白酶；所述步骤3‑‑4需在无菌环境下操作；所述脱脂奶粉中蛋白质含量为50%~60%。