[发明专利]一种快速检测α-珠蛋白基因簇拷贝数变异的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测α-珠蛋白基因簇拷贝数变异的方法，包括以下步骤：设计一对通用引物，三种TaqMan探针，三对加尾引物，样本检测：分别以待检基因和标准基因为模板，加入三对加尾引物，进行首轮巢式荧光定量PCR，得到首轮PCR产物；以首轮PCR产物为模板，加入通用引物及三种TaqMan探针，进行二轮荧光定量PCR，并在每个循环的反应结束后采集荧光信号；根据采集的荧光信号，定量样品的α1、α2珠蛋白基因拷贝数。本发明在同一反应管中扩增多个目的片段的反应效率能达到高度一致，能准确区分出α-珠蛋白基因11种基因型。本发明操作简单，通量高，只需要2步PCR循环反应，整个过程不超过2h。

主权项

一种快速检测α‑珠蛋白基因簇拷贝数变异的方法，包括以下步骤： 1)设计一对通用引物，包括上游通用引物和下游通用引物；2)分别设计三种TaqMan探针，分别作为α1珠蛋白基因、α2珠蛋白基因和内参基因的TaqMan探针；3)分别设计上述α1珠蛋白基因、α2珠蛋白基因和内参基因的加尾引物，上游加尾引物从5’至3’端的序列依次为上游通用引物的结合序列、相应基因的TaqMan探针的结合序列、基因特异识别序列，下游加尾引物从5’至3’端的序列依次为下游通用引物的结合序列、相应基因的特异识别序列；4)样本检测：分别以待检样品基因、标准样品基因作为模板，分别加入上述三对加尾引物，进行首轮巢式荧光定量PCR，得到首轮PCR产物；分别以首轮PCR产物为模板，加入上述通用引物及三种TaqMan探针，进行二轮荧光定量PCR，并在每个循环的反应结束后采集荧光信号；根据采集的荧光信号，计算待检样品的α1、α2珠蛋白基因拷贝数。