[发明专利]一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法有效
| 申请号： | 201210103880.6 | 申请日： | 2012-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN102618620A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 鲁晓锋;史小娟 | 申请（专利权）人： | 上海健耕医药科技有限公司;上海云泽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 201112 上海市闵行区*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法，包括：(1)设计引物，PCR扩增金属基质蛋白酶的全长cDNA；(2)构建以Retro-X Tet-Off为载体的表达体系；(3)将上述构建完成的载体对细胞系进行转染，并筛选阳性克隆，当细胞铺满皿底后，将培养基换为不含DOX的培养基，诱导MMPs的表达；(4)筛选出金属基质蛋白酶抑制剂。本发明建立了一个基于Tet-off表达系统的，能最大程度模拟MMP的作用环境的方法，用于MMP抑制剂的筛选，相对一般金属基质蛋白酶抑制剂体外筛选更准确。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 水平 筛选 金属 基质 蛋白酶 抑制剂 方法 | ||
【主权项】：
一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法，包括：(1)设计引物，PCR完成扩增金属基质蛋白酶的全长cDNA；(2)将上述扩增的cDNA插入pRetroX‑Tight‑Pur的多克隆位点，构建以Retro‑X Tet‑Off为载体的表达体系；(3)将上述构建完成的载体对细胞系进行转染，并筛选阳性克隆，当细胞铺满皿底后，将培养基换成不含DOX的培养基，诱导MMP的表达；(4)设空白对照组、阳性对照组、阴性对照组和不同药物浓度处理组，用细胞膜探针对细胞膜进行染色观察，利用对细胞形态学的分析评估候选待评价药物对MMP的作用。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海健耕医药科技有限公司;上海云泽生物科技有限公司，未经上海健耕医药科技有限公司;上海云泽生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201210103880.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
