[发明专利]一种基于表面等离子共振技术的种质资源中特定DNA序列鉴定方法有效

专利信息
申请号: 201210110730.8 申请日: 2012-04-17
公开(公告)号: CN102661932A 公开(公告)日: 2012-09-12
发明(设计)人: 王利兵;于艳军;苏荣欣 申请(专利权)人: 王利兵
主分类号: G01N21/55 分类号: G01N21/55
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 300042 天津*** 国省代码: 天津;12
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摘要: 一种基于表面等离子共振的种质资源中特定DNA序列资源的鉴定方法,属于种质资源鉴定技术领域。本发明包括传感表面适配体固定、样品标记、样品鉴定、传感元件再生四个步骤,利用同一传感芯片对不同DNA序列进行鉴定;其特征在于以免疫球蛋白E作为标记分子探针,将传感芯片表面连接免疫球蛋白E适配体;对食品样品进行一系列预处理,加入单链DNA的免疫球蛋白E标记物,混合后竞争结合金属纳米粒子修饰的单链DNA相应的适配体;利用表面等离子体共振检测仪检测免疫球蛋白E的含量,间接鉴定特定单链DNA序列;并对传感芯片进行再生,用于检测其它特定DNA序列。本发明提供了一种种质资源中特定DNA序列的有效鉴定方法,实现了同一表面等离子体共振传感芯片对不同DNA序列的鉴定,具有极高的通用性。
搜索关键词: 一种 基于 表面 等离子 共振 技术 种质 资源 特定 dna 序列 鉴定 方法
【主权项】:
一种应用表面等离子体共振仪的种质资源中特定DNA序列鉴定方法,利用同一传感芯片对特定种质资源或DNA序列进行鉴定;其特征在于包括以下步骤:(一)传感芯片表面适配体固定:选择链霉亲和素SA修饰的传感芯片,通过通入5‑50μL浓度为1‑50μg/L已标记生物素的免疫球蛋白E适配体,在表面等离子体传感芯片上固定上免疫球蛋白E适配体;(二)对特定单链DNA进行免疫球蛋白E标记;(三)标准溶液配制:用0.01‑0.1mol/L(pH=7.4)的磷酸盐缓冲液配置免疫球蛋白E标记的特定单链DNA溶液,浓度为0.1ng/mL至1mg/mL,加入等量特定单链DNA相应的适配体或纳米粒子修饰的适配体充分混合,获得特定单链DNA标准溶液,其中免疫球蛋白E标记的特定单链DNA量还可以大于加入的适配体量;(四)建立对照曲线:采用表面等离子共振谱仪测量,以0.02mol/L的磷酸盐缓冲液为测量基准,通过微泵通入5‑100μL特定单链DNA标准溶液,记录下表面等离子体共振仪光谱图,获得特定单链DNA表面溶液的表面等离子体共振谱图稳定值A;(五)检测鉴定:提取种质资源总DNA,进行不对称PCR扩增反应,获得单链DNA;对于待测单链DNA样品进行一系列预处理,取待测单链DNA溶液与免疫球蛋白E标记的特定单链DNA溶液充分混合后,竞争结合特定单链DNA相应的适配体或纳米粒子修饰的适配体,其中免疫球蛋白E标记的特定单链DNA量还不少于加入的适配体量;采用表面等离子体共振检测仪记录待测单链DNA的光谱图;通过检测免疫球蛋白E,间接鉴定特定DNA是否存在;对比待测单链DNA样品的谱图稳定值B与特定单链DNA的谱图稳定值A,当B小于A时,说明种质资源中含有特定DNA序列,当B等于A时,说明不含有特定DNA序列;(六)通入0.01‑0.05mol/L(pH为2‑3)的甘氨酸‑盐酸缓冲溶液,冲洗传感芯片表面,进行传感元件再生,用于其它种质资源中特定DNA序列的鉴定。
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