[发明专利]一种小球藻蛋白分子制备及鉴定方法无效
| 申请号： | 201210115374.9 | 申请日： | 2012-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN102675435A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 周文礼;陈成勋;孙金辉;毛海涛;王庆奎;毕相东;乔秀亭;邢克智;何家瑞;韩鈺松 | 申请（专利权）人： | 天津农学院;天津海友佳音生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/405 | 分类号： | C07K14/405;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;G01N30/02;G01N30/72;G01N24/08 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 王融生 |
| 地址： | 300384*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一种小球藻蛋白分子制备及鉴定方法将小球藻泥悬浮于pH 7.0的0.001mol/L磷酸缓冲液中，反复冻融3次；冰浴中超声波破碎9min；在温度4℃下，采用12000r/min离心30min，取上清液，加30％饱和度硫酸铵；在温度4℃下静置24h，再在温度4℃下，采用12000r/min离心30min；将上清液用超滤杯浓缩至200mL，沉淀用少量PBS溶解，置入透析膜于pH 7.0的0.001mol/L PBS中搅拌透析2d，聚乙二醇-6000包埋浓缩至60mL。采用本方法分离小球藻的纯化蛋白分子，蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。能准确地明确蛋白分子的具体化学结构。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小球藻 蛋白 分子 制备 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种小球藻蛋白分子制备方法，其特征在于：将小球藻泥悬浮于pH 7.0的0.001mol/L磷酸缓冲液(PBS)中，反复冻融3次；冰浴中超声波破碎9min；在温度4℃条件下，采用12000r/min离心30min，取上清液，加30％饱和度硫酸铵；在温度4℃条件下静置24h，再在温度4℃条件下，采用12000r/min离心30min；将上清液用超滤杯浓缩至200mL，沉淀用少量PBS溶解，置入透析膜于pH 7.0的0.001mol/L PBS中搅拌透析2d，聚乙二醇‑6000包埋浓缩至60mL；经硅胶柱层析：将代谢产物干法拌硅胶后通过硅胶柱层析进行粗分离，洗脱液依次为石油醚、体积比1∶1的石油醚∶二氯甲烷、体积比1∶2的石油醚∶二氯甲烷、二氯甲烷、体积比5∶1的二氯甲烷∶甲醇、体积比5∶3的二氯甲烷∶甲醇、体积比1∶1的二氯甲烷∶甲醇、甲醇、体积比1∶1的甲醇∶水；再经TLC薄板层析：TLC薄板层析使用硅胶铝板，展层剂采用二氯甲烷和甲醇不同体积(V/V)配比的溶剂，样品展层后在254nm的紫外照射下，用5ml浓硫酸溶解于100ml乙醇中的5％硫酸喷洒后，在温度100℃条件下加热5min，进行检测；具有相同展层斑点的分离相合并，SDS‑聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，Bradford法测定蛋白含量。
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