[发明专利]苯妥因检测方法

摘要

本发明公开了两种苯妥因的检测方法，包括以下步骤：将待测样本与抗苯妥因特异性抗体接触；根据待测样本中的物质与抗体的结合情况，判断样本中苯妥因的含量，其中抗苯妥因特异性抗体由苯妥因免疫原免疫动物得到。本发明的两种检测方法，特异性高，可以准确地测定苯妥因的含量，为苯妥因的临床药物浓度实时监测提供了依据。

主权项

1.一种苯妥因(5，5-Diphenyl-2，4-imidazolidinedione)的均相酶免疫检测方法(Homogeneous Immunoassay)，使用苯妥因的均相酶免疫检验试剂，该检测试剂由苯妥因特异性抗体和苯妥因酶标偶联物组成，包括以下操作步骤：(1)采用全自动生化分析仪，将待测样本与苯妥因检测试剂分别放入样本仓和试剂仓；(2)按照下表进行检测项目参数设置；(3)测定OD340nm的吸光值；(4)制作标准曲线来定量样本中的苯妥因浓度；上述操作步骤(2)还可以通过以下优选方案实现。所述抗苯妥因特异性抗体由苯妥因免疫原免疫动物后生产得到，所述的苯妥因免疫原，其结构式如式(I)所示：式(I)式中，R为连接基团，载体具有免疫原性。R为-O-(CH₂)_n-COO-，-S-(CH₂)_n-COO-，-NH-(CH₂)_n-COO-或-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之间的整数。优选R为-O-(CH₂)_n-COO-，n值是1至10。更优选R为-O-(CH₂)₄-COO-；所述载体为具有免疫原性的物质，常选用蛋白质。优选为血清蛋白，血蓝蛋白和甲状腺球蛋白，更优选为牛血清蛋白。苯妥因酶标偶联物的制备方法如下：(1)酶溶液制备：称取酶，选自β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate Dehydrogenase，G6PDH)，优选G6PDH，在室温条件下溶解于磷酸缓冲液中，终浓度为2-6mg/mL；(2)用有机溶剂溶解链接R连接基团的苯妥因衍生物，使其终浓度为10-50mg/mL，通过三丁胺法进行活化，并与酶溶液进行交联反应，经纯化和透析后得到苯妥因酶标偶联物，所述的有机溶剂选自DMF、DMSO、甲醇或乙醇，优选地，有机溶剂为DMF。