[发明专利]一种用于基于焦磷酸原理的454高通量测序的emPCR方法无效
| 申请号： | 201210130266.9 | 申请日： | 2012-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN102719528A | 公开（公告）日： | 2012-10-10 |
| 发明（设计）人： | 孟和;孙子奎;陈永灿 | 申请（专利权）人： | 上海派森诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 胡美强;沈利 |
| 地址： | 200231 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于基于焦磷酸原理的454高通量测序的emPCR方法，其是在配制emPCR扩增混合液的过程中，将超纯水、5×扩增液、扩增引物、emPCR扩增混合液和PPiase的体积做了调整；在进行扩增反应时将扩增条件由一步扩增改为两步扩增。采用本发明所述emPCR的方法能够有效降低非特异性扩增信号，减少冗余的数据，使有效数据的产量提高30％，同时提高了实验效率，节约了实验成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 基于 磷酸 原理 454 通量 empcr 方法 | ||
【主权项】：
一种用于基于焦磷酸原理的454高通量测序中emPCR的方法，其包括步骤：1)乳化油、emPCR扩增混合液和试剂准备；2)DNA文库捕获；3)乳化；4)扩增；5)磁珠回收；6)DNA文库磁珠富集；7)测序引物退火，即制得测序所用的emPCR产物；其特征在于，步骤1)所述的emPCR扩增混合液包括下列各组分：emPCRAdditive，30.6％～43.0％(v/v)；5×扩增液，18.4％～21.5％(v/v)；扩增引物，2.0％～7.5％(v/v)；emPCR酶混合液，2.6％～5.9％(v/v)；PPiase，0.1％～0.3％(v/v)；余量为水。
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