[发明专利]一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法无效
| 申请号： | 201210131678.4 | 申请日： | 2012-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN103048463A | 公开（公告）日： | 2013-04-17 |
| 发明（设计）人： | 曾令文;方志远;张文娟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/543 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫;郝文婷 |
| 地址： | 510530 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法。本发明所述方法是通过DNA结合蛋白在低严谨杂交条件下能增强双链DNA结合的稳定性，在高严谨洗脱条件下能够稳定的以双链形式存在而不被洗脱的原理，用来检测DNA结合蛋白。本发明所述方法是一种检测DNA结合蛋白表达和活化水平的新方法，具有高灵敏度、低费用、不需要使用核酸酶和针对DNA结合蛋白的特异性抗体的优点，既解决了以往检测方法中需要核酸酶和特异性抗体的问题，又能保证检测灵敏度，还可以对尚未有特异性抗体的DNA结合蛋白进行检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 不同 严谨 用于 检测 dna 结合 蛋白 微孔 核酸 杂交 elisa 方法 | ||
【主权项】：
一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法是根据当DNA结合蛋白存在时，在高严谨洗脱条件下能增强双链DNA结合的稳定性而不被洗脱的原理，设计两条核酸序列，一条核酸序列是固定探针，含有DNA结合蛋白特异结合的核酸序列，该序列末端依据微孔板表面的化学基团进行相应的化学修饰，以便连接固定到微孔板表面；另一条核酸序列是显色探针，是与固定探针不完全互补的核酸序列，其末端依据显色系统进行相应的修饰，以便检测分析；显色探针与含DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物与微孔板共孵育时，在高严谨洗脱条件下能够形成稳定双链而不被洗脱下来，通过末端修饰标记进行显色时有颜色显示；若不含有DNA结合蛋白，显色探针在高严谨洗脱条件下将会被洗脱下来，显色时将无颜色显示。
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