[发明专利]成熟油菜次生休眠种子RNA的提取方法

摘要

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及成熟油菜次生休眠种子高质量RNA的快速提取方法。所述的方法选用RNAplantplusreagent植物总RNA提取试剂，通过β-巯基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚类物质氧化，应用醋酸钠去除多糖类物质对RNA的影响，并减少抽提次数。使用本发明方法完成油菜次生休眠种子RNA的提取仅需30分钟，且RNA质量好、纯度高，并具有试剂用量少、经济节约等优点，已成功应用于后续的mRNA分离、纯化、建库以及高通量转录组测序。本发明为探明油菜种子次生休眠的分子机制提供了重要的技术保障，同时也可为其他多糖、多酚类植物的成熟休眠种子RNA提取提供技术参考。

主权项

成熟油菜次生休眠种子RNA的提取方法，选用RNA plant plus reagent植物总RNA提取试剂，通过β‑巯基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚类物质氧化，应用醋酸钠去除多糖类物质对RNA的影响，并减少抽提次数，缩短提取时间， 其步骤包括：（1）取0.1g成熟的油菜次生休眠种子放入加有液氮的研钵中，迅速磨成粉末；（2）将步骤（1）制得的粉末加入含有RNA plant plus植物总RNA提取试剂的离心管，涡旋振荡至彻底混匀；室温静置，再加入预冷的苯酚‑氯仿‑异戊醇（25：24：1）混匀，4℃13000rpm离心5min，取上清液；（3）将步骤（2）制得的上清液转移至一新离心管中，加入醋酸钠和无水乙醇，倒转2‑3次混匀后冰上静置，4℃ 13000rpm离心4min，弃上清，乙醇洗沉淀，室温下干燥，用RNase‑free ddH2O溶解沉淀即得。