[发明专利]一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法，将小鹅瘟病毒接种于鹅胚的尿囊腔中进行增殖，提取病毒制备抗原；然后将提取的病毒抗原免疫健康猪，再从被免疫猪中免疫器官中提取抗小鹅瘟病毒转移因子。本发明所制备的转移因子能够有效抑制小鹅瘟病毒和保护正常机体细胞免受小鹅瘟病毒的感染，预防小鹅瘟疾病的发生。此外，本发明的制备方法在生产上设备简单、生产时间短，易于操作。

主权项

一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法，其特征在于：将小鹅瘟病毒接种于鹅胚的尿囊腔中进行增殖，提取病毒制备抗原；然后将提取的病毒抗原免疫健康猪，再从被免疫猪的免疫器官中提取抗小鹅瘟病毒转移因子，具体制备步骤如下：1）小鹅瘟病毒抗原的制备：将小鹅瘟病毒接种于12‑14日龄鹅胚的尿囊腔中进行增殖，35℃，培养3‑5天，提取尿腔液和绒尿膜，研磨超声波处理后，经6000‑8000r/min离心，弃沉淀留上清液，得到病毒粗抗原；2）纯化抗原：将病毒粗抗原液加入到不连续梯度密度为20‑60%的蔗糖离心管上，经过超速心处理，根据小鹅瘟病毒粒子的大小确定病毒带所在离心管的位置，吸取病毒抗原，透析除去抗原中的蔗糖，得到纯病毒抗原备用；3）病毒抗原免疫猪：随机选取健康的猪，随机选取，按病毒抗原病毒滴度制定接种剂量，采用皮下多点注射接种方式，免疫3次，每次间隔一周，然后从宰杀猪中无菌取其脾脏、胸腺、淋巴组织，放置‑20℃保存；4）从被免疫猪中提取抗小鹅瘟病毒转移因子：①将所取的脾脏、胸腺、淋巴组织经过无菌去离子水清洗干净，然后剔净脏器表面的筋膜及脂肪组织，再用PH为6.8‑7.2的PBS缓冲液清洗干净。②将洗干净的组织剪成小块之后放入到组织匀浆机中，再加入2‑3倍预冷的0.85%生理盐水，1500‑2000r/min转速，每次2 min，经过不去次匀浆，制得匀浆液；③匀浆液经过‑60‑ ‑80℃快速冷冻,再快速解冻，经过4‑5次的冻融，然后将冻融后的溶液放到低温超声波细胞破碎仪中破碎3s停3s，经过20min破碎，得到精细的匀浆液，再加3倍的冷生理盐水，混匀，经过低温7000‑8000r/min离心10min，取上清液，经过滤处理，留滤液备用；④用稀盐酸将滤液酸度值调PH为5.4‑5.6，净化滤液，将净化后的滤液用0.22um滤膜过滤后收集，再将上述的滤液经过截留分子量为6000道尔顿的中空纤维膜超滤，收集后滤液再次用滤膜进行无菌过滤，即为抗小鹅瘟病毒转移因子。