[发明专利]一种从湖泊沉积物样品中提取纯化总DNA的高效方法无效
申请号: | 201210137580.X | 申请日: | 2012-04-23 |
公开(公告)号: | CN103374566A | 公开(公告)日: | 2013-10-30 |
发明(设计)人: | 赵吉;李靖宇 | 申请(专利权)人: | 内蒙古大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 010021 内蒙古*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | 本发明公开了从湖泊沉积物中快速提取总DNA的高效方法,包括以下步骤:(1)取0.3g-1.0g左右样品于装有若干颗2.5mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中,加入300-1000μL DNA提取缓冲液,再加入50-500μL重铬酸钾溶液,使用Vortex-2(Mobio Laboratories Inc)涡旋10s-1min,加入50-300μL SDS溶液,涡旋3min,65℃温育5-60min(2)加入50-200μL氯化钾溶液,上下剧烈颠倒混匀数次。本方法可快速高效提取沉积物土壤总DNA,同时满足去腐除臭的特殊效果,解决了富营养化水体沉积物提取DNA的技术难点,为土壤、淤泥、沉积物、污泥等环境样品宏基因组研究和各类基因扩增提供高纯度的DNA供试样品。 | ||
搜索关键词: | 一种 湖泊 沉积物 样品 提取 纯化 dna 高效 方法 | ||
【主权项】:
1.一种沉积物环境样品总DNA快速提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取0.3g-1.0g左右沉积物土样于装有三颗2.5mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中,300-1000μLDNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl,1.5mol/L NaCl,1%CTAB,pH 8.0),再加入50-500μL重铬酸钾溶液(0.05mol/L-3mol/L),使用Vortex-2(Mobio Laboratories Inc)涡旋10s-1min,加入50-300μLSDS溶液(5%-20%),涡旋3min,65℃温育5-60min;(2)加入50-200μL氯化钾溶液(0.05mol/L-5mol/L),上下剧烈颠倒混匀数次,12000r/min离心2min;(3)取上清1000μL于2mL离心管中,加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),12000r/min离心5min;(4)取上清900μL于1.5mL离心管中,加入0.6倍体积的异丙醇,冰浴10min,12000r/min离心5min;(5)弃上清,用70%的酒精洗沉淀,自然干燥或冷冻干燥;(6)50μLTE溶解沉淀。
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