[发明专利]一种超高活力羊细管精液冷冻方法

摘要

本发明涉及羊精液冷冻方法，具体为一种超高活力羊细管精液冷冻方法。本发明解决了现有羊冷冻精液解冻后活率和活力低且冷冻效果不稳定的问题。一种超高活力羊细管精液冷冻方法包括如下步骤：吸取羊新鲜精液注入装有清洗液的第一离心管底部，在CO₂培养箱中静置30-60min，高活力精子上游至上清液，吸取上清液，注入第二离心管中离心，离心管底部获得高浓度、高活力的精液；吸取该浓缩的高活力精液加入冷冻稀释液中，混合均匀后灌装细管，程序冷冻，液氮保存，输精前解冻。用本发明所述方法进行冷冻前羊精子高活力筛选后，羊细管冷冻精液解冻后活率可达到0.45-0.60，完全满足羊冷冻精液人工授精要求，可广泛适用于羊批量生产中。

主权项

1.一种超高活力羊细管精液冷冻方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）羊精子冷冻前高活力筛选：首先配制清洗液：在100000份双蒸水中加入氯化钾21.0 份，氯化钠653.0份，一水磷酸二氢钠6.2份，碳酸氢钠209.0份，乳酸钠11.0 份，六水氯化镁9.0份，Hepes缓冲盐122.0份，丙酸钠10.5份，葡萄糖255.0 份，牛血清白蛋白600份混合均匀即得清洗液；将清洗液装入第一支无菌离心管在CO₂培养箱中预平衡2h；从CO₂培养箱中取出第一支无菌离心管，用吸管从集精杯吸出羊精液注入第一支无菌离心管底部，将第一支无菌离心管45°倾斜置于管架上放入CO₂培养箱中静置30-60min，此时死弱精子停留在第一支无菌离心管的下部而活力强的精子游上来进入第一支无菌离心管的上清液中；从CO₂培养箱中取出第一支无菌离心管，用吸管吸取第一支无菌离心管的上清液注入第二支无菌离心管中，2000-2500 r/min离心5-8min，弃掉上清液，此时第二支无菌离心管底部的液滴中富含密集的高活力精子，从而得到高活力精液；（2）将上述高活力精液加入冷冻稀释液中，混合均匀后，用细管灌装机灌装到0.25ml细管中进行冷冻保存；（3）输精前解冻。