[发明专利]一种提高植物发酵沼气产量的方法

摘要

本发明公开了一种提高植物发酵沼气产量的方法。属生物技术领域。首先克隆白腐真菌的木质素过氧化物酶基因和猛过氧化物酶基因，枯草芽孢杆菌的漆酶基因和木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β葡萄糖苷酶基因；构建含以上六种基因表达框架的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒，将其质粒转化枯草芽孢杆菌获得工程菌；将枯草芽孢杆菌工程菌应用于植物原料发酵沼气的预处理过程以及与天然的沼气发酵微生物联合应用于发酵植物原料生产沼气过程，起到显著提高植物原料的利用率和增加沼气产量的作用。本发明解决了植物发酵沼气中遗留的木质素和纤维素不能有效地被水解利用的问题，有利于利用植物发酵沼气的产业的发展。

主权项

一种提高植物发酵沼气产量的方法，其特征在于：应用分子生物学技术克隆白腐真菌的木质素过氧化物酶基因、白腐真菌的猛过氧化物酶基因，枯草芽孢杆菌的漆酶基因，木霉的葡聚糖内切酶基因、木霉的葡聚糖外切酶基因和木霉的β葡萄糖苷酶基因；构建含木质素过氧化物酶基因表达框架，猛过氧化物酶基因表达框架、漆酶基因表达框架、葡聚糖内切酶基因表达框架，葡聚糖外切酶基因表达框架和β‑葡萄糖苷酶基因表达框架的大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭质粒(含有以上所述的6种酶基因表达框架、大肠杆菌复制起点、革兰氏阳性菌复制起点、氨苄青霉素抗性基因和G418抗性基因)；将以上构建的大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭质粒转化枯草芽孢杆菌，筛选高表达木质素过氧化物酶、猛过氧化物酶、漆酶、葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β‑葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌转化子作为携带木质素过氧化物酶基因表达框架、猛过氧化物酶基因表达框架、漆酶基因表达框架、葡聚糖内切酶基因表达框架、葡聚糖外切酶基因表达框架和β葡萄糖苷酶基因表达框架的大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭质粒的毕赤酵母工程菌；将以上所述的携带木质素过氧化物酶基因表达框架、猛过氧化物酶基因表达框架、漆酶基因表达框架、葡聚糖内切酶基因表达框架、葡聚糖外切酶基因表达框架和β葡萄糖苷酶基因表达框架的大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭质粒的枯草芽孢杆菌工程菌应用于植物生产沼气的预处理以及与天然的沼气发酵微生物共同厌氧消化植物生产沼气。