[发明专利]一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法

摘要

一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法，将蚯蚓放置清水中24h，排除体内的粪便，将其储存冰箱中待用；用磷酸缓冲溶液，在冰水浴条件下匀浆，制成匀浆液，离心得粗酶提取液，保存在冰箱中。100μL粗提取液中加入表面活性剂Triton X-114溶液和柠檬酸缓冲溶液用二次水定容到10mL充分振荡并摇匀。将其上述溶液放置在水浴温度为35℃恒温水槽中平衡9min，而后将离心，分层后下层即为纯化后乙酰胆碱酯酶制品。本发明提供的是蚯蚓血清乙酰胆碱酯酶的纯化萃取方法，其酶来源便宜广泛，并且灵敏度高，制备工艺简单稳定，生产成本低。

主权项

一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于包括如下步骤：1）蚯蚓预处理：将蚯蚓放置清水中24h，排除体内的粪便，将其储存在4℃冰箱中待用；2）蚯蚓血清的粗提取：以磷酸缓冲液(pH8.0，0.1mol/L)为制备粗提取液的溶液，按照匀浆液比为1:1[蚯蚓质量(g)/磷酸缓冲液体积(mL)]制成的匀浆液，在4℃下离心(10000r/min)20min得粗酶提取液；3）浊点萃取过程：取用10mL的离心管，而后加入100μL粗酶提取液，再加入表面活性剂Triton X‑114(0.09%,w/v)溶液和0.6mL pH4.1柠檬酸缓冲溶液用二次水定容到10mL充分振荡并摇匀；4）将第3）步得到的溶液放置在水浴温度为35℃恒温水槽中平衡9分钟，而后将其取出，在4000r/min的离心机中离心5分钟，分层后将其上层溶液倾倒，下层即为纯化后乙酰胆碱酯酶。