[发明专利]一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组DNA的提取方法，向产糖被细菌的培养物中加入提取缓冲液和溶菌酶，37℃下静置10min，再加入蛋白酶K，65℃下静置1h；加入苯酚-氯仿-异戊醇的混合溶液，抽提；加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提；加入冷乙醇和醋酸钠，离心，沉淀经乙醇洗涤后室温干燥，加DNA提取缓冲液溶解；加入RNA酶，37℃下静置10min；加入PEG6000，混匀，50℃下静置10min；加入苯酚-氯仿-异戊醇的混合溶液，抽提；加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提；加入冷乙醇和醋酸钠溶液，离心，沉淀经乙醇洗涤后室温干燥，加ddH2O或者TE缓冲液溶解，即为提取到的DNA溶液。

主权项

一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组DNA的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）向3~6mL产糖被细菌的培养物中加入400μL DNA提取缓冲液和10μL溶菌酶的水溶液，37℃下静置10min，再加入10μL蛋白酶K的水溶液，65℃下静置1h；（2）向步骤（1）得到的混合溶液中加入等体积的苯酚‑氯仿‑异戊醇的混合溶液，抽提，离心，取上清；（3）向步骤（2）得到的上清中，加入等体积的氯仿‑异戊醇混合溶液，抽提，离心，取上清；（4）向步骤（3）得到的上清液中，加入2倍体积的冷乙醇和0.1倍体积的醋酸钠的水溶液，离心，沉淀经体积百分浓度为70%的乙醇洗涤后室温干燥，加DNA提取缓冲液溶解；（5）向步骤（4）得到的体系中加入RNA酶的水溶液10μL，37℃下静置10min；（6）向步骤（5）得到的体系中加入PEG6000，混匀，50℃下静置10min；（7）向步骤（6）得到的体系中加入等体积的苯酚‑氯仿‑异戊醇的混合溶液，抽提，离心，取上清；（8）向步骤（7）得到的上清中，加入等体积的氯仿‑异戊醇混合溶液，抽提，离心，取上清；（9）向步骤（8）得到的上清中，加入2倍体积的冷乙醇和0.1倍体积的醋酸钠溶液，离心，沉淀经体积百分浓度为70%的乙醇洗涤后室温干燥，加200μl ddH2O或者TE缓冲液溶解，即为提取到的DNA溶液，‑20℃保存备用。