[发明专利]一种榉树无菌播种方法

摘要

一种榉树无菌播种方法，包括以下步骤：外植体采集、消毒；对成熟合子胚的愈伤诱导、愈伤增殖培养、芽分化培养、单芽生根培养。采用本发明能够利用萌发困难的榉树成熟合子胚为外植体获取榉树组培生根小苗，增殖系数达到3～5倍/30天，生根率达75%以上，有效解决了萌芽率低的榉树种子繁育再生植株的问题。

主权项

一种榉树无菌播种方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1.1外植体的采集、消毒收集榉树种子，将采回的种子用清水浸泡1天，再用洗洁精搓洗，然后用去离子水清洗1～3次，置于超净工作台上去种皮，将去除种皮的成熟合子胚用75％乙醇浸泡灭菌10 s，蒸馏水冲洗1～3次，再用0.1％HgCl2以振荡的方式进行灭菌处理 4～6 min，用无菌水冲洗3～5次，1.2成熟合子胚愈伤诱导、愈伤增殖、芽分化培养、单芽生根培养将消毒好的成熟合子胚接种到改良WPM+6‑BA1.0～2.0 mg·L‑1+蔗糖30000 mg•L‑1+琼脂4000 mg•L‑1的培养基上进行诱导培养，培养条件为25±2℃，1000～1500LX，每天光照10～14 h为宜，30 d后将诱导的大团愈伤组织分割成小团，转接到改良WPM+6‑BA0.5～1.0 mg·L‑1+蔗糖30000 mg•L‑1+琼脂4000 mg•L‑1的增殖培养基上，以促进愈伤组织的增殖，愈伤组织增殖到一定数量后，转入改良WPM+6‑BA2.0mg·L‑1+NAA0～1.0 mg·L‑1+蔗糖30000 mg•L‑1+琼脂4000 mg•L‑1的分化培养基上，诱导愈伤组织分化出芽，将诱导出的株高1.0cm以上的单芽剪下，接种到生根培养基1/2改良WPM+ IBA 0.1～1.0mg•L‑1+蔗糖20000 mg•L‑1+琼脂5000 mg•L‑1中诱导生根，其中，所述改良WPM培养基的组成为：KNO3                   900mg·L‑1NH4NO3                 400 mg·L‑1CaCl2.2H2O              264 mg·L‑1MgSO4.7H2O              370 mg·L‑1Ca(NO3)2. 4 H2O           556 mg•L‑1KH2PO3                  270 mg•L‑1MnSO4.4 H2O             22.3 mg•L‑1ZnSO4.7 H2O             8.6 mg•L‑1FeSO4·7H2O              27.8mg•L‑1Na2‑EDTA·2H2O          37.3mg•L‑1CuSO4.5 H2O             0.025 mg•L‑1H3BO3                   6.2 mg•L‑1Na2MoO4.2 H2O           0.25 mg•L‑1KI                     0.83 mg•L‑1CoCl2.6 H2O             0.025 mg•L‑1维生素B1               0.4 mg•L‑1维生素B6               0.5 mg•L‑1烟酸                    0.5 mg•L‑1甘氨酸                  2.0 mg•L‑1肌醇                    100 mg•L‑1。