[发明专利]一种克隆类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开一种克隆类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法以及克隆不同倍数的类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法。所述方法为将人工合成的末端分别含有可以配对的同尾酶的三个双链DNA分子连接到质粒中，两对同尾酶的位点分别被限制性内切酶切除后再连接，形成符合非结晶区氨基酸的三联密码子，转化、筛选获得含有完整类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的质粒，再利用在完整的类家蚕丝素蛋白非结晶区基因5’端和3’端设计的同尾酶进行加倍克隆，转化、筛选获得含有多倍类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的质粒。最后双酶切后得到单倍和多倍类家蚕丝素蛋白非结晶区基因。本发明所述方法操作简便，获得的基因准确性高。

主权项

一种克隆类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、合成分别编码SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的Link1、Link2、Link3三个双链DNA分子；其中Link1的5’端和3’端分别含有BglII和NheI的粘末端碱基；Link2的5’端和3’端分别含有SpeI和HindIII的粘末端碱基，紧接HindIII位点的上游含有NheI位点；Link3的5’端和3’端分别含有SpeI和HindIII的粘末端碱基；B、将Link1、Link2、Link3连接到质粒pSLFA1180FA中，转化感受态细胞，挑克隆，抽提质粒，酶切筛选并测序鉴定获得正确质粒，NheI/HindIII双酶切、琼脂糖凝胶电泳回收小片段即得。