[发明专利]制备新伐他汀及中间体的方法

摘要

本发明提供了制备新伐他汀及各种中间体的合成化学和化学酶方法。在一个方面，在本发明方法中应用酶，如水解酶，例如酯酶。

主权项

用于制备新伐他汀的方法，其包括：(i)包括以下步骤的方法：(a)酶促水解洛伐他汀、洛伐他汀酸或洛伐他汀酸盐，产生三醇酸或三醇酸盐；(b)内酯化和酰化三醇酸，产生4‑乙酰基内酯，其中所述酰化包括：通过区域选择性酰化4’‑OH，保护内酯环上的4位羟基(4’‑OH)；(c)酶促酰化4‑乙酰基内酯的8位羟基(8’‑OH)，产生4‑乙酰基新伐他汀；和(d)化学地或是酶促地选择性去除4’位的酰基保护基团，从而产生新伐他汀；(ii)(i)所述的方法，其中所述步骤(b)中的酰化包括，通过酶促区域选择性酰化4’‑OH，保护内酯环上的4位羟基(4’‑OH)；(iii)(i)或(ii)所述的方法，其中所述步骤(c)中的酶促酰化4‑乙酰基内酯8位羟基(8’‑OH)，酶促地区域选择性酰化第8位，产生4‑乙酰基新伐他汀；(iv)同型二酰基化方法，包括以下步骤：(a)酶促水解洛伐他汀、洛伐他汀酸或洛伐他汀酸盐，产生三醇酸；(b)通过内酯化，从三醇酸产生二醇内酯；(c)通过化学酰化，酰化二醇内酯的内酯环上的第4位(4’‑OH)和第8位(8’‑OH)，产生4,8‑二乙酰基内酯；和(d)通过酶促水解，选择性去除4’位的酰基，从而产生新伐他汀；(v)(i)至(iv)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是在单独的反应容器中进行的；(vi)(i)至(v)中任一项所述的方法，其中至少两个步骤是在单独的反应容器中进行的；(vii)(i)至(vi)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是用细胞提取物进行的；(viii)(i)至(vii)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是在全细胞中进行的；(ix)(i)至(viii)中任一项所述的方法，进一步包括新伐他汀的结晶；(x)(ix)所述的方法，进一步包括新伐他汀的重结晶；(xi)(i)至(x)中任一项所述的方法，进一步包括重新内酯化，用以提供具有所需纯度的新伐他汀；(xii)(i)至(xi)中任一项所述的方法，其中至少一个酶促反应是用水解酶进行的，所述水解酶是由与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5有至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、 69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性，或序列完全相同(100％)的核酸所编码的，或者是其酶促活性片段；(xiii)(i)至(xii)中任一项所述的方法，其中至少一个酶促反应是通过水解酶进行的，所述水解酶具有的序列和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性，或序列完全相同(100％)，或者是其酶促活性片段；(xiv)(i)至(xiii)中任一项所述的方法，其中所述方法包括酶促水解洛伐他汀，产生三醇酸或三醇酸盐，随后通过内酯化三醇酸和酶促酰化内酯环的第4位(4’‑OH)，产生4‑酰基内酯，之后酶促酰化4‑酰基内酯，产生4‑乙酰基新伐他汀，然后通过区域选择性酶促水解4‑乙酰基新伐他汀，产生新伐他汀。