[发明专利]一种香蕉花叶心腐病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明涉及一种香蕉花叶心腐病毒(Banana streak virus，BSV)恒温基因扩增快速检测试剂盒，其试剂包括：由两对引物构成的引物混合液；浓度为8U/μl的Bst DNA聚合酶；8U的反转录酶；RNA提取液，所述RNA提取液包含：100mM Tris-HCl(pH7.4)、1M KC1、10mM EDTA、和2％(w/v)PVPP；反应缓冲液，所述反应缓冲液包含：10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4、5mM甜菜碱＝8∶5∶2∶10；核酸染料；阳性对照：含有香蕉花叶心腐病毒外壳蛋白的cDNA；阴性对照：100mM Tris-HCl(pH 8.0)和50mMEDTA。本发明还涉及该试剂盒的使用方法。该试剂盒通过对样品中香蕉花叶心腐病毒的核酸提取、恒温基因扩增反应、最后通过对反应液颜色的肉眼判断来实现对香蕉花叶心腐病毒高特异性、快速、高效、高灵敏度、简便的分子检测。

主权项

一种香蕉花叶心腐病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于，其试剂包括：由两对引物构成的引物混合液，所述两对引物为：外引物1‑CMV‑F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:l所示，外引物2‑CMV‑B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，内引物1‑CMV‑FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，内引物2‑CMV‑BIP，其核苷酸序列如SEQID NO:4所示，所述内引物1‑CMV‑FIP和所述内引物2‑CMV‑BIP的浓度均为40pmol/μl，所述外引物1‑CMV‑F3和所述外引物2‑CMV‑B3的浓度分别为5pmol/μl；浓度为8U/μl的Bst DNA聚合酶；8U的反转录酶；RNA提取液，所述RNA提取液包含：100mM Tris‑HCl(pH7.4)、1M KC1、10mM EDTA、和2%(w/v)PVPP；反应缓冲液，所述反应缓冲液包含：10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4、5mM甜菜碱＝8:5:2:10；核酸染料；阳性对照：含有香蕉花叶心腐病毒外壳蛋白的cDNA；阴性对照：100mM Tris‑HCl(pH 8.0)和50mM EDTA。