[发明专利]重组热带剥爪螨变应原Blo t 5蛋白及其制备方法与用途无效
| 申请号： | 201210157336.X | 申请日： | 2012-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN103421106A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 蔡俊龙;杨彬;付永锋;程训佳 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;G01N33/68;A61K39/35;A61P33/14 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，涉及一种重组热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白及其制备方法和用途。本发明从培养的热带剥爪螨提取RNA，通过PCR获得热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白的编码基因后，构建变应原Blo t5蛋白的表达载体pET19b-Blo t5。经大量的表达纯化及进一步的鉴定，证实本发明的重组热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白可以与热带剥爪螨过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合，具有与天然热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白相同免疫活性。本发明的制备方法，可获得具有生物学活性的可溶性重组热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白，可用于热带剥爪螨引起的过敏性疾病的诊断和治疗，能避免天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 热带 剥爪螨变应原 blo 蛋白 及其 制备 方法 用途 | ||
【主权项】：
重组热带剥爪螨变应原Blo t5蛋白，其特征在于，该重组蛋白为由序列SEQ ID No：1的核苷酸序列编码的蛋白；通过下述方法制得：（1）从克隆化培养的热带剥爪螨菌体中分离总RNA，通过RT‑PCR合成cDNA；（2）合成引物：Blo t5‑S5‑CCCATATGAAGAAGGATGATTTCCGAA‑3Blo t5‑as5‑CCCTCGAGTTATTGGGTTTGAATATC‑3（3）以cDNA为模板，通过PCR获得热带剥爪螨变应原Blo t5编码基因片段；（4）将编码基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；（5）采用Ni2+亲和层析将重组热带剥爪螨变应原Blo t5提纯，获得纯化的重组热带剥爪螨变应原Blo t5。
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