[发明专利]恩拉霉素标准品的高压液相制备方法

摘要

一种恩拉霉素标准品的高压液相制备方法，包括发酵菌体试样溶液制备，将发酵菌体按30-90ml/g的比例悬浮在由丙酮：盐酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，用超声破碎仪或者超声机进行细胞破碎，得到含有恩拉霉素的提取液，收集上清液，用滤膜过滤作为试样溶液备用；动物饲料试样溶液制备，再相应条件进行反相高压液相色谱，根据组分的保留时间进行收集，之后按常规的旋转蒸发工艺除去溶剂，即得恩拉霉素组分标准品。本发明的恩拉霉素标准品的高压液相制备方法，具有以下优点：1、前处理简单快捷，易于操作；2、收集方法简单；3、制备的标准品纯度高，纯度能达到90%以上。

主权项

一种恩拉霉素标准品的高压液相制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）、发酵菌体试样溶液制备：将发酵菌体用去离子水清洗后，按30‑90ml/g的比例悬浮在由丙酮：盐酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，丙酮为分析纯浓度，盐酸溶液的浓度为2mol/L，用超声破碎仪或者超声机进行细胞破碎10min，得到的混合物在20℃，180rpm的条件下振荡提取90 min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的转速下离心10min，收集上清液，用0.45μm滤膜过滤作为试样溶液备用，试样溶液浓度不超过2000μg/ml；动物饲料试样溶液制备： 按GB/T 14699.1的规定选取动物饲料样品200g‑500g，用四分法缩至100g，粉碎通过0.45mm孔径筛，混匀，贮存于磨口瓶中备用，取上述动物饲料样品5‑10g，加入到80ml的由丙酮：盐酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，丙酮为分析纯浓度，盐酸溶液的浓度为2mol/L，在20℃，180rpm的条件下振荡提取90min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的转速下离心10min，收集上清液，用0.45μm滤膜过滤作为试样溶液备用，试样溶液浓度不超过2000μg/ml；（2）、恩拉霉素标准品制备：按下列条件进行反相高压液相色谱： 试样溶液浓度：不超过2000μg/ml； 进样量：100μl；色谱柱： C18柱半制备型，长250mm，内径10mm，粒度5μm；流动相：B：色谱纯乙腈, A：0.2%乙酸，制法是，吸取2ml色谱纯乙酸，溶于1000ml纯净水中； 流速：2.0ml/min； 柱温：30℃； 检测波长：267nm； 根据组分A和组分B的保留时间进行收集；将收集的组分A峰和组分B峰分别按常规的旋转蒸发工艺除去溶剂，即得恩拉霉素组分标准品；所述的发酵菌体是指发酵液中恩拉霉素产生菌的菌丝体；所述的动物饲料是指动物配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料或恩拉霉素预混剂。