[发明专利]一种梨叶片诱导不定芽再生植株的方法

摘要

本发明属于植物细胞工程领域，涉及一种梨叶片诱导不定芽再生植株的方法。采用试管苗幼嫩的叶片作为外植体，在超净工作台上，用无菌刀片垂直于叶片中脉横切2～4个伤口，然后接种在不定芽诱导培养基上，暗培养3周左右后转到光下培养，待其长出不定芽后转到增殖培养基上，以促进芽的生长；待不定芽长到2cm左右，将其转接到生根培养基中培养，从而获得完整植株。本发明的方法操作简单，成本低廉，效果良好，可以快速的建立起稳定、高效的叶片再生体系，有效的解决了梨叶片不定芽再生诱导的技术问题，从而为通过抗病基因的遗传转化和染色体组加倍培育多倍体这两种手段达到改良果树品种提供前提条件。

主权项

梨叶片不定芽再生诱导的方法，其特征在于通过如下步骤实现：（1）选取试管苗健康幼嫩的叶片，用无菌刀片垂直于叶片中脉横切2～4个伤口，叶片背面朝下接种于不定芽诱导培养基上，暗培养20~32天后转到光下培养；培养温度25±2℃；所述的不定芽诱导培养基为：NN69+TDZ 1.0~3.0mg/L+IBA 0.2~0.5mg/L+蔗糖30~50g/L+琼脂5.0~6.5g/L,PH值为5.8；（2）待叶片长出不定芽后，将不定芽转接到增殖培养基上，在光照强度1500‑2000lx，光照14~18h/d，温度25±2℃的培养条件促进其抽茎生长，从而获得茎干粗壮的试管苗；所述的增殖培养基为：1/2MS+6‑BA1.0~2.0mg/L+IBA0.2~0.5mg/L+GA31.5~3.0mg/L+蔗糖25~40g/L+琼脂5.0~6.5g/L，培养基pH值为5.8；（3）待试管苗长到2.5~3.5cm将苗接到生根培养基中，暗处理7~10d后再转光下培养，50‑60天后得到生根苗；所述的光下培养条件为：光照强度1500‑2000lx，光照14~18h/d，温度25±2℃；生根培养基为：1/2MS+IBA 0.5~0.9mg/L+蔗糖50~70g/L+琼脂5.0~6.5g/L，培养基pH值为5.8。