[发明专利]利用植物病毒载体进行miRNA靶标模拟序列构建和表达的方法有效
申请号: | 201210174886.2 | 申请日: | 2012-05-30 |
公开(公告)号: | CN102703500A | 公开(公告)日: | 2012-10-03 |
发明(设计)人: | 刘玉乐;汤旸;沙爱华 | 申请(专利权)人: | 清华大学 |
主分类号: | C12N15/83 | 分类号: | C12N15/83;C12N15/66;A01H5/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;任凤华 |
地址: | 100084 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了利用植物病毒载体进行miRNA靶标模拟序列构建和表达的方法。实验证明,化学合成编码miRNA158或miRNA172靶标模拟序列的DNA分子插入植物病毒表达载体pTY102得到的重组表达载体再导入烟草叶片中,3周后即可检测到烟草的表型变化和miRNA靶标基因表达量的升高。本发明不需进行搭桥PCR,方法简单;本发明利用了病毒所具有的表达量高、寄主范围广及在整株植物上扩散快速的特点,可快速和方便的降低植物内源miRNA的表达水平,为研究植物内源miRNA功能提供了一个新的途径。 | ||
搜索关键词: | 利用 植物 病毒 载体 进行 mirna 靶标 模拟 序列 构建 表达 方法 | ||
【主权项】:
构建miRNA靶标模拟序列表达载体的方法,包括如下步骤:1)化学合成编码所述miRNA靶标模拟序列的双链DNA分子,所述双链DNA分子的两端均带有限制性内切酶粘性末端或平末端;2)将所述双链DNA分子插入载体的所述限制性内切酶位点间,得到表达所述miRNA靶标模拟序列的重组表达载体。
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