[发明专利]试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法

摘要

本发明涉及一种试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，包括以下步骤：第一步、冻融破壁；第二步、絮凝提取；第三步、分段盐析；第四步、透析；第五步、纯化。本发明采用从湖泊打捞的蓝藻作为原料，来源丰富，价格低廉；所用试剂均为价格低廉的市售品；整个方法成本低廉，且产率高，能获得高纯度藻蓝蛋白。本发明各步骤均可直接应用于规模化生产，有利于实现产业化。

主权项

试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，包括以下步骤：第一步、冻融破壁：将蓝藻脱水分，制得藻泥；将藻泥先冷冻冻结，再取出融化，冻融至少两次；第二步、絮凝提取：用水稀释冻融后的藻泥，混匀得到藻浆，其中藻泥与水的质量比为0.5‑1.5∶100；向藻浆中加入质量浓度5‑15％的聚合氯化铝溶液并混匀得到混合液，其中聚合氯化铝溶液与藻浆的质量比为0.5‑1.0∶100；混合液静置分层，取蓝色上清液即得藻蓝蛋白粗提液；第三步、分段盐析：向藻蓝蛋白粗提液中加入固体硫酸铵或硫酸铵溶液使硫酸铵饱和度达到15‑25％；随后静置、离心后弃去沉淀得上清液，向其中加入固体硫酸铵或硫酸铵溶液使硫酸铵饱和度达到45‑55％；随后静置、离心后弃去上清液得沉淀；将所得沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，得藻蓝蛋白溶液；第四步、透析：将所得藻蓝蛋白溶液置透析袋中，以磷酸盐缓冲液为透析液进行透析；透析后将藻蓝蛋白溶液离心弃去沉淀得上清液，即得透析后藻蓝蛋白溶液；第五步、纯化：向透析后藻蓝蛋白溶液中加入聚乙二醇和混合磷酸钾盐，使聚乙二醇的质量浓度达到10‑13％、并使混合磷酸钾盐的质量浓度达到10‑12％，所述混合磷酸钾盐由磷酸二氢钾和磷酸氢二钾构成；搅拌均匀，静置分层后取深蓝色上清液，即得试剂级藻蓝蛋白溶液。