[发明专利]利用废弃食用菌菌包发酵兼性厌氧芽孢杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种利用废弃食用菌菌包发酵兼性厌氧芽孢杆菌的方法，包括菌种复壮、菌体扩培、废弃菌包营养优化及预处理、接种，立体培养以及干燥粉碎等步骤，本发明利用食用用菌菌包发酵，可控性强，水分、温度等容易控制在一定范围内；不容易染菌，工作人员进出发酵车间，以及空气的流动都不容易染菌；质量稳定，活菌含量起伏不大；利用的废弃菌包，原料成本低廉；后期处理方便，且不会因为阴天来不及干燥而大量染菌。

主权项

一种利用废弃食用菌菌包发酵兼性厌氧芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：菌体复壮：在无菌条件下，从液体石蜡保存的芽孢杆菌试管中挑取一环芽孢杆菌于灭菌后的生理盐水中，然后放于80℃的恒温水浴锅中10 min，将此菌悬液摇匀并稀释成不同浓度，吸取100 uL分别涂布在无菌平皿中，37℃倒置恒温培养24h，个体较壮的菌落即可作为目的菌落；步骤二：菌体扩培：挑取复壮后的目的菌划线于装有无菌固体LB培养基的茄形培养瓶中，37℃恒温倒置培养24h；用无菌水冲洗茄形瓶中的菌落，将冲洗下的菌悬液接入装有液体LB培养基的三角瓶中继续扩大培养，37℃恒温振荡培养24h，然后三角瓶中的菌悬液再接入200升的液体发酵罐中37℃恒温培养，24小时后再将此菌悬液接入2000升的液体发酵罐中；步骤三：废弃菌包营养优化及预处理：配置营养基，液体营养液的成分为每升营养液中含大豆浸出液15%，葡萄糖5%，磷酸二氢钾0.5‰，氯化钠0.8%，维生素C 0.1‰，然后用计量喷枪将配置好的补充营养源打入废弃菌包，每包喷入200mL，将补充过营养基的菌包灭菌，121℃灭菌40min；其中大豆浸出液是指取20公斤的大豆，加水100升浸泡12小时之后用蒸汽煮30分钟，然后用网筛将豆渣过滤掉，得到的液体；步骤四：接种：通过计量喷枪将发酵罐中的种子液按菌包容积的0.2%剂量注入灭菌后的菌包中；步骤五：立体培养：将接种后的菌包传输到无菌房中立体培养48h；步骤六：干燥粉碎：将培养好的菌包用沸腾干燥机干燥，并用粉碎机粉碎，制成粉末。