[发明专利]一种柑橘溃疡病菌的DNA水浴沉淀提取方法

摘要

本发明一种柑橘溃疡病菌的DNA水浴沉淀提取方法。本发明方法将新鲜菌体加入洗涤缓冲液洗涤、再经裂解缓冲液水浴，抽提缓冲液及饱和酚、氯仿、异戊醇混合溶液抽提，乙醇洗涤沉淀后，晾干加入灭菌ddH2O溶解沉淀，在﹣20℃保存即可。本发明能够快速有效地提取到柑橘溃疡病菌的模板DNA，简捷快速。本法不需要特别的仪器，实验成本相对较低。使用本发明方法制备的DNA样品能够满足PCR方法对柑橘溃疡病菌进行分子诊断的需要。因此本发明建立了用水浴法快速抽提柑橘溃疡病菌的模板DNA的方法，为应用PCR技术进行早期诊断和预知检测提供基础和技术储备。

主权项

一种柑橘溃疡病菌的DNA水浴沉淀提取方法，其特征在于包括以下步骤：(a) 将新鲜菌体加入洗涤缓冲液充分混合，使细菌细胞沉淀，弃上清液；(b) 往步骤(a)制得的沉淀中加入裂解缓冲液，振荡悬浮，并于65 ℃水浴，完全反应；(c) 加入65 ℃预热的抽提缓冲液，充分混合，加入等体积饱和酚、氯仿、异戊醇混合溶液抽提，离心使变性的蛋白沉淀，取上清液；(d) 按照体积比为1:2的比例往步骤(c)制得的上清液中加入无水乙醇，﹣20℃放置待充分反应后，再高速离心至沉淀完全去上清液，加入体积浓度为70 %的乙醇洗涤沉淀，晾干后加入灭菌ddH2O溶解沉淀，﹣20℃保存备用。