[发明专利]区分水稻组织内外纹枯病菌丝的染色和观察方法

摘要

本发明公开了一种区分水稻组织内外纹枯病菌丝的染色和观察方法，包括以下步骤： 1）将直径为0.8~1.2mm的纹枯菌菌丝块接种到PDA培养基中进行培养，直至形成直径为1～2 mm的白色未成熟菌核； 2）将白色未成熟菌核接种到水稻叶鞘内侧，直至水稻叶鞘的接种位点上出现病斑；3）割取上述长度为2～4cm含有病斑的水稻叶鞘，放入透明缓冲液中浸泡至水稻叶鞘脱色透明，并用卡拉唑黑E染料室温染色7~9 h；得染色叶鞘；4）将所述染色叶鞘进行荧光显微镜观察。采用本发明的方法可以利用荧光显微镜的荧光差异显示有效区分水稻叶鞘表面和内部的纹枯菌菌丝体。即，本发明能应用于抗病品种的选育。

主权项

区分水稻组织内外纹枯病菌丝的染色和观察方法，其特征是包括以下步骤：1）、将直径为0.8~1.2mm的纹枯菌菌丝块接种到PDA培养基中进行培养，直至形成直径为1～2 mm的白色未成熟菌核；培养条件为：温度为27±1℃；暗培养；2）、将步骤1）所得的白色未成熟菌核接种到水稻叶鞘内侧，直至水稻叶鞘的接种位点上出现病斑；培养条件为：16小时光照，光照强度45～60 μmol m‑2.s‑1，温度为27±1℃；8小时暗培养，温度为27±1℃；上述光照和暗培养交替进行；相对湿度≥95%；3）、割取上述长度为2～4cm含有病斑的水稻叶鞘，放入透明缓冲液中浸泡至水稻叶鞘脱色透明，并用卡拉唑黑E染料室温染色7~9 h；得染色叶鞘；4）、将所述染色叶鞘进行荧光显微镜观察。