[发明专利]一种筛选拟穴青蟹免疫刺激反应灵敏基因的方法无效
| 申请号： | 201210199865.6 | 申请日： | 2012-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN102732622A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 张凤英;蒋科技;马凌波;房娅博;孙曼曼 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种筛选拟穴青蟹免疫刺激反应灵敏基因的方法，包括：（1）将拟穴青蟹分成感染组和对照组，感染组注射100μL副溶血弧菌，对照组注射100μL生理盐水，同时处理24h，分别在第0h，1h，3h，6h，24h取样；抽取拟穴青蟹血液，采用Trizal法提取血细胞总RNA，-80℃下保存；（2）以候选基因序列为靶序列，以β-肌动蛋白基因作为内参基因，设计多重基因表达引物，进行反转录反应和PCR反应，得到PCR产物；将PCR产物稀释后在GeXP表达分析系统中上样，测定候选基因的表达水平，即得到免疫刺激反应灵敏基因。本发明工艺简单，成本低，能够从众多相关基因中迅速筛选到反应最为敏感的基因，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 拟穴青蟹 免疫 刺激 反应 灵敏 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种筛选拟穴青蟹免疫刺激反应灵敏基因的方法，包括：（1）将拟穴青蟹分成感染组和对照组，感染组注射100μL副溶血弧菌，对照组注射100μL生理盐水，同时处理24h，分别在第0h，1h，3h，6h，24h取样；抽取拟穴青蟹血液，采用Trizal法提取血细胞总RNA，‑80℃下保存；（2）以候选基因序列为靶序列，β‑肌动蛋白作为内参基因，设计多重基因表达引物，进行反转录反应和PCR反应，得到PCR产物；将PCR产物稀释，于GeXP表达分析系统中上样，测定候选基因的表达水平，即得到免疫刺激反应灵敏基因。
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