[发明专利]一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化AD生成ADD的方法在审
| 申请号： | 201210210431.1 | 申请日： | 2012-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN102703494A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;许正宏;张温清;邵明龙;徐美娟;张显;李会 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/32;C12R1/125 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化AD生成ADD的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)的基因扩增，然后利用pMA5质粒，实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明构建以4-AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3-甾酮-Δ1-脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.1％(w/v)4-AD为底物，全细胞转化10h，底物摩尔转化率达到65.7％，是出发菌株相对转化率的20倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 重组 bacillus subtilis 细胞 转化 ad 生成 add 方法 | ||
【主权项】：
一种重组表达载体pMA5‑ksdD，其特征是：通过PCR技术获得来源于新金色分枝杆菌的KSDD基因，与克隆载体pMD‑18T相连，获得该基因的大量克隆，经双酶切，片段纯化后与表达载体pMA5连接。
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