[发明专利]姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用。它以姜黄素为原料药，采用壳寡糖、硬脂酸形成的接枝物作为药物载体，制备过程包括两个部分，第一，以碳二亚胺为交联剂，壳寡糖和硬脂酸共价结合形成壳寡糖-硬脂酸接枝物（CSO-SA）载体；第二，CSO-SA载体溶液中加入一定量的姜黄素DMSO溶液，经络合反应形成CSO-SA/curcumin载药纳米胶束。本发明制备的胶束的平均粒径为114.7nm，Zeta电位18.5mV。体内外试验显示CSO-SA/curcumin具有较强的细胞内化能力，可以增强姜黄素在肿瘤细胞内的积聚，对MCF-7、MCF-7/Adr和大肠癌细胞具有较强杀伤作用；体内给药可以选择性抑制肿瘤细胞的生长而对小鼠无明显的毒性作用。

主权项

一种姜黄素壳聚糖‑硬脂酸嫁接物胶束的制备方法，其特征在于它的步骤如下：（1）低分子量壳聚糖的合成取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL 重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤，80℃下搅拌半小时后，加入0.5g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；（2）壳聚糖硬脂酸接枝物的合成取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20 mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖‑硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖‑硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1～8mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入重量百分比浓度为4% 的碳酸氢钠2ml和重量百分比浓度为0.1%的三硝基苯磺酸2ml, 37℃放置2小时，加人2mol/L盐酸2ml，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖‑硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖‑硬脂酸接枝物氨基取代度；(3)姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备称取氨基取代度为5～6％的壳寡糖硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，再在4°C振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素壳聚糖‑硬脂酸嫁接物胶束。