[发明专利]一种干涉膨胀素基因Exp2制备植物悬浮培养小细胞系的方法

摘要

一种干涉膨胀素基因Exp2制备植物悬浮培养小细胞系的方法，本发明属于生物技术领域。首先，选定基因Exp2两个保守区分别为正向片段I、II以及对应的反向序列I’和II’；构建I-AC-II’-II-CT-I’的RNAi片段；并筛选出其插在pCAMBIA2300植物表达载体的根瘤农杆菌工程菌。然后，以甘草为例，农杆菌介导法依次获得转化的愈伤组织及其稳定表达的悬浮细胞。再次，通过看护培养，利用悬浮细胞，筛选生长速度快、效果好的单细胞系愈伤组织以及由此形成的悬浮细胞系。最后，通过培养工艺优化，获得悬浮细胞生长和产物积累的最佳发酵工艺参数。利用本发明方法获得的密度大、培养周期短、成本低、生产效率高的细胞系，为大规模开发和生产药用植物有效成分提供优质种源。

主权项

一种干涉膨胀素基因Exp2制备植物悬浮培养小细胞系的方法。其特征是：1.构建膨胀素基因Exp2的RNAi表达载体工程菌。利用Genbank报道的膨胀素基因核苷酸序列，选择两段保守性较高的核苷酸区域分别作为正向片段(I和II)，并以其为依据分别设置其对应的反向序列(I’和II’)，通过比对Genbank注册的植物膨胀素基因Exp2的核苷酸序列，选定其两个保守区分别为正向片段I、II以及对应的反向序列I’和II’；构建I-AC-II’-II-CT-I’的RNAi片段；筛选出插在pCAMBIA2300表达载体并能转化植物细胞的工程菌。