[发明专利]一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学检测技术领域。本发明利用壳聚糖分散的石墨烯导电能力强、稳定性好，金杂化的介孔二氧化硅纳米复合材料比表面积大，生物相容性好，催化效率高等特点显著提高传感器的灵敏度。该方法通过壳聚糖分散的石墨烯、交联剂、纳米材料与抗体的复合溶液、牛血清蛋白的层层自组装构建免疫传感器。基于抗原抗体的特异性结合，借助电化学工作站仪器，通过记录相应抗原修饰传感器前后的电流变化，可直接检测水及食品中的环境雌激素。本发明的优点在于灵敏度高、特异性好、易于操作、检测限低，能实现实际样品中多种环境雌激素的灵敏、快速、准确检测。

主权项

一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法，步骤如下：(1)用壳聚糖(Chit)溶液分散石墨烯(GS)，超声至形成分散均匀的石墨烯‑壳聚糖溶液(GS‑Chit)；所述的分散均匀的GS‑Chit，GS浓度为0.5～1.5mg·mL‑1，Chit浓度为1.0～3.0mg·mL‑1；(2)用原位还原法将氯金酸在介孔二氧化硅(SBA‑15)的孔道中还原，得到金杂化的介孔二氧化硅纳米复合材料(Au@SBA‑15)；所述的氯金酸和SBA‑15的质量比为1∶0.5～1.5；(3)将交联剂戊二醛、Au@SBA‑15溶液和环境雌激素抗体(Ab)均匀混合，制备成纳米复合材料与抗体的混合液(Au@SBA‑15‑Ab)；交联剂戊二醛的质量分数为2.5％，Au@SBA‑15溶液浓度为3.5mg·mL‑1，环境雌激素抗体浓度为1.0mg·mL‑1；所述的交联剂戊二醛、Au@SBA‑15溶液和环境雌激素抗体的体积比为1∶1.5～2.5∶1～3；所述的Au@SBA‑15‑Ab是将交联剂戊二醛、Au@SBA‑15溶液、环境雌激素抗体(Ab)放在振荡器上振荡10～30h后离心洗涤，用pH为6.8～7.8的磷酸盐缓冲液(PBS)稀释得到；(4)利用电极表面自组装技术将GS‑Chit和Au@SBA‑15‑Ab修饰在电极表面；(5)将浓度为100μg·mL‑1的牛血清白蛋白(BSA)滴涂在步骤4)Au@SBA‑15‑Ab修饰的电极表面，湿润保持1h后用水冲洗掉多余的BSA，置于4℃下保存待用，制备成无标记型电化学免疫传感器。