[发明专利]在原核系统中分离纯化包涵体形式HIV-1蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了在原核系统中分离纯化包涵体形式HIV-1蛋白酶的方法，该方法中联合使用较低浓度的去垢剂和超声波破碎将杂蛋白与目的蛋白分离，并且操作过程中应用Amicon搅拌式超滤装置，有效缩短了包涵体蛋白的纯化时间。此外，该方法中蛋白复性采用了透析复性，透析过程温和，复性后蛋白酶活性和纯度较高，经简单的超滤浓缩即可进行蛋白质结晶生长和酶动力学测定，用于晶体学和酶学研究。

主权项

一种在原核系统中分离纯化包涵体形式HIV‑1蛋白酶的方法，包括如下步骤：1)将离心收集的HIV‑1蛋白酶表达菌用溶液A(20mM Tris‑HCl，pH8.0，500mM NaCl，2mM EDTA)悬浮，并加入核酸酶DNase I，使用低温超高压细胞破碎仪裂解细胞，将高压破菌仪调至1200bar，将菌液反复高压3次，然后在菌液中各加入2％TritonX‑100和2％Tween20，搅拌均匀，使用超声波处理，然后离心收集沉淀；2)用溶液B(20mMTris‑HCl，pH8.0，500mM NaCl，2mM EDTA，2％TritonX‑100，2％Tween20)均匀重悬沉淀，直至成无块状物的包涵体悬浊液，然后将悬浊液超声处理，然后离心收集沉淀，重复操作3次；3)用溶液C(20mM Tris‑HCl，pH8.0，10mM NaCl，8M Urea)彻底溶解包涵体，离心取上清，然后选用截留分子量为30kD超滤膜与Amicon搅拌式超滤装置配合使用将杂蛋白与HIV‑1蛋白酶进行分离，收集30kD超滤膜下的蛋白溶液，即得纯化的HIV‑1蛋白酶溶液。