[发明专利]一种制备鸡痘病毒抗体的方法

摘要

本发明公开了一种鸡痘病毒抗体的制备方法，属于生物技术领域。本发明的一种鸡痘病毒抗体的制备方法包括：（1）鸡痘病毒的培养和粗制抗原的制备；（2）浓缩和纯化抗原的制备；（3）动物免疫及抗血清的制备；（4）抗体的纯化。采用本发明方法制备得到的抗体，其抗体纯度高，特异性好。能够广泛用于检测鸡痘病毒感染的试剂的制备。

主权项

一种鸡痘病毒抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）鸡痘病毒的培养和粗制抗原的制备；（2）粗制抗原的浓缩和纯化；（3）动物免疫及抗血清的制备：使用步骤（1）得到的粗制抗原制成初次免疫原进行初步免疫后，使用步骤（2）得到的纯化抗原制成再次免疫原对动物进行再次免疫，分离得到抗血清；（4）抗体的纯化：抗体的纯化包括抗体的初步纯化和抗体的亲和层析纯化；所述的初步纯化是指抗血清中加入饱和硫酸铵，用膜封口冰上放置3‑5h后，4℃离心，将上清移入到干净的离心管中，然后用12~14kD的透析袋或管4℃过夜透析；所述的亲和层析纯化是将初步纯化后的抗体与结合缓冲液充分混合，置4℃摇床平衡过夜后，加入到Sepharose4B层析柱上进行层析分离，用3倍体积的结合缓冲液充分洗涤后，再用10ml洗脱液洗脱收集；所述的结合缓冲液为75mM Tris，pH7.5；所述的洗脱液为0.1M甘氨酸溶液，pH2.7;（5）纯化后的收集液立即加入pH8.8且含有5MNaCl的3M Tris缓冲液中，调节pH至6.8~7.0。