[发明专利]细胞穿膜肽hPP10的生产及其介导质粒DNA转染的方法

摘要

本发明涉及生物医学领域，具体讲，涉及一种新型人源性细胞穿膜肽hPP10的生产及其介导质粒DNA转染的方法。hPP10是源于人类细胞核蛋白，赖氨酸特异性去甲基酶4A的一段多肽序列，具有穿透细胞膜功能，并可携带蛋白，核酸（DNA质粒）跨膜进入多种细胞，是一种极具开发前景的蛋白、核酸等生物活性分子的跨膜运输载体。

主权项

一种新型人源性细胞穿膜肽hPP10的化学合成方法，包括以下步骤：（1）用Fmoc基团对α‑氨基进行保护的赖氨酸通过一个支臂连结到不溶性载体树脂上；（2）用TFA(三氟乙酸)溶液洗涤赖氨酸―支臂―树脂，使α‑氨基脱保护；（3）将第二个预先用适当的缩合剂DCC活化的α‑氨基保护的异亮氨酸通过耦联反应与赖氨酸形成共酯连接上去；（4）用TFA溶液洗涤异亮氨酸―支臂―树脂，使α‑氨基脱保护；（5）将第三个预先用适当的缩合剂DCC活化的α‑氨基保护的脯氨酸通过耦联反应与异亮氨酸形成共酯连接上去；重复进行上述脱保护、耦联，直到耦合上最后一个氨基酸精氨酸，脱去Fmoc保护基团，合成完成；（6）将切割试剂加入到肽‑树脂中，把肽链从树脂上切割下来，同时也将各个氨基酸上的侧链保护基团从肽链上切割下来，加入乙醚，沉淀多肽，获得多肽粗品；（7）运用HPLC/MS进行多肽的鉴定和纯化，最终得到所需多肽。