[发明专利]一种鲤鱼精巢生物反应器的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种鲤鱼精巢生物反应器的制备方法及应用，一种鲤鱼精巢生物反应器，其制备步骤为：A.筛选在精液中高表达基因的启动子;B.构建在鱼类精巢中特异表达的目的基因表达载体；C.将重组基因片段导入红鲤受精卵，使其在基因组中稳定整合；D.目的基因在转基因红鲤精巢中高效表达，获得一种高效表达目的基因的生物反应器。利用鱼类精巢基因特异表达的属性，可构建安全高效、可持续利用的生物反应器；同时鱼类具有扩群速度快和养殖成本低的特点，可实现生物反应器的规模化、低成本运行。

主权项

一种鲤鱼精巢生物反应器，由以下步骤制备得到：1）、筛选斑马鱼精液中高表达基因的启动子：对斑马鱼的精液蛋白进行SDS‑PAGE电泳分离，割取电泳条带进行质谱检测，获得六个在斑马鱼精液中特异表达的基因；提取斑马鱼精巢总RNA，RT‑PCR筛选出六个基因中表达量最高的两个基因，基因库序列号为BC122153和BC076027；与斑马鱼基因组数据库比较，获得这两个基因的启动子序列，命名为Q2和Q3；2）、重组基因表达载体的构建：通过重叠PCR方法，构建分别由Q2和Q3驱动的目的蛋白基因表达载体；3）、转基因鱼的制备：采用显微注射法，将两个重组基因片段分别导入红鲤受精卵中，常规方法孵化、养殖；4）、阳性转基因鱼的筛选：采集性成熟转基因红鲤精液，提取基因组DNA，采用常规PCR方法，检测筛选转植基因阳性个体；5）、高表达阳性转基因鱼的筛选：采用ELISA方法，检测转基因红鲤精液中目的蛋白含量，选择高效表达个体作为父本，繁殖扩群，获得反应器群体。