[发明专利]一种生产人源化抗体或抗原结合片段的方法

摘要

本发明公开了一种生产人源化抗体或抗原结合片段的方法。该方法包括：获得非人类生物针对某一抗原的抗体的重链可变区和轻链可变区序列；将其与人胚系抗体的氨基酸序列对比；分别选择与非人源抗体重链可变区和轻链可变区同源性最高的人胚系抗体氨基酸序列；分别构建人胚系抗体重链和轻链可变区框架的文库并组装为完整的框架组装文库；表达所述的框架区组装文库，从中筛选能够与所述的抗原结合的人源化的重链可变区和轻链可变区，制备人源化重链可变区和轻链可变区的人源化抗体或抗原结合片段。本发明避免了在抗体工程化过程中对抗体结构分析的依赖，同时能够对抗体的表达、稳定性进行筛选，能最大程度保持人源化抗体的亲和力。

主权项

1.一种生产人源化抗体或抗原结合片段的方法，包括：（1）获得非人类生物针对某一抗原的抗体的重链可变区和轻链可变区序列，（2）将非人源抗体重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列与人胚系抗体的氨基酸序列对比，（3）分别选择与非人源抗体重链可变区和轻链可变区同源性最高的人胚系抗体氨基酸序列，（4）构建人胚系抗体重链可变区框架的文库，包含编码多个重链可变区的核酸序列，其中每个重链可变区包含框架1、框架2、框架3和框架4，所述的每一个核酸序列独立地选自同源的人胚系抗体重链可变区的相应框架区和非人源抗体的互补决定区，（5）构建人胚系抗体轻链可变区框架的文库，包含编码多个轻链可变区的核酸序列，其中每个轻链可变区包含框架1、框架2、框架3和框架4，每一个核酸序列独立地选自同源的人胚系抗体轻链可变区的相应框架区和非人源抗体的互补决定区，（6）将所述的人胚系抗体重链可变区框架文库和轻链可变区框架文库组装为完整的框架组装文库，（7）表达所述的框架区组装文库，（8）通过ELISA方法检测噬菌体与抗原结合能力，或在相似条件下扩增淘筛后噬菌体并开始随后两轮次的筛选；不止一个的人源化抗体重链可变区、轻链可变区从框架区组合库中筛出；在大肠杆菌TG1细胞中扩增从淘筛获得的噬菌体，随后制备噬菌粒，将噬菌粒载体中的Fab片段亚克隆到FASEBA载体中用于随后的表达筛选；经FASEBA系统筛选后，采用亲和力排序来进一步分离对抗原具有高亲和力的抗体；（9）制备包含人源化重链可变区和轻链可变区的人源化抗体或抗原结合片段。