[发明专利]一种诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法

摘要

发明属生物医学领域，具体涉及诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法。本方法中，将人胚胎干细胞或人诱导的多能干细胞在含有N2的培养基中诱导后，转入含有神经基础培养基、敲除的血清替代物和烟酰胺的视网膜诱导培养基，获得视网膜前体细胞，本发明方法可明显提高人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的分化率；所分化的视网膜前体细胞可用于移植治疗视网膜神经元不可逆性变性疾病，如：年龄相关性黄斑变性和视网膜色素变性；还用于来源于患者的iPS细胞上作为细胞模型用于药物筛选和基因干扰实验。与现有技术比较，本方法所用的小分子化合物少，能有效地避免非人源性因素的影响，而获得的视杯样细胞球的率却明显高于现有技术的诱导分化方法。

主权项

一种诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法，其特征在于，将人胚胎干细胞或人诱导的多能干细胞在含有N2的培养基中诱导后，转入含有神经基础培养基、敲除的血清替代物和烟酰胺的视网膜诱导培养基，获得视网膜前体细胞，其包括步骤：（1）将人多能干细胞消化后，制成细胞球，第3天更换培养基为神经诱导分化培液；（2）第7天进行贴壁，第14天更换培养基为视网膜细胞诱导分化培液，得神经管样的细胞结构；（3）第16天将形成的类神经管样结构吹下来，第17天将大的细胞球吹成稍小的细胞球，形成典型的视杯样细胞球；（4）第21天获得形态结构典型的视杯样细胞球。