[发明专利]一种筛选大蒜抗叶枯病体细胞突变体的方法

摘要

本发明涉及一种大蒜抗叶枯病体细胞突变体筛选方法。该方法包括：（1）以大蒜茎盘为外植体，以叶枯病粗毒素不同的体积分数为培养基，确定筛选压；(2)以大蒜茎盘为外植体，接种附加粗毒素体积分数为5％的培养基上诱导出抗性愈伤组织；（3）配置附加不同体积分数的粗毒素增殖培养基，将抗性愈伤组织接种上；（4）将得到的愈伤组织接种到不含毒素的愈伤组织增殖培养基中，淘汰掉非抗性的愈伤组织或细胞；（5）将抗性愈伤组织或细胞接种至粗毒素体积分数为25％的芽分化培养基中诱导芽的分化；（6）将诱导得到的抗性芽接种到不含毒素的芽分化培养基中；（7）将得到的抗性芽接种至MS基本培养基上，再生植株；（8）对再生植株进行分子水平的鉴定。

主权项

一种筛选大蒜抗叶枯病体细胞突变体的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）以大蒜茎盘为外植体，分别接种在粗毒素体积分数分别为0％、10％、20％、30％、40％的筛选培养基上，确定筛选压；(2)以大蒜茎盘为外植体，在 MS+B5有机+2,4‑D 2.0 mg/L +KT 0.5 mg/L +5％毒素的培养基上培养30天，诱导出抗性胚性愈伤组织；(3)将诱导出的抗性胚性愈伤组织逐次接种到粗毒素体积分数分别为5％，10%，15%，20%，25%的愈伤组织增殖培养基MS+B5有机+2,4‑D 0.5 mg/L+KT 1.0 mg/L上，以利用多步法筛选抗性胚性愈伤；（4）将步骤3中所得到的抗性胚性愈伤接种至不含毒素的增殖培养基中，使筛选到的抗性胚性愈伤恢复生长；（5）将步骤4中抗性胚性愈伤组织接种到含25％粗毒素的芽分化培养基MS+KT 0.5 mg/L +6‑BA 1.0 mg/L上，促使芽分化，获得抗性芽；（6）将得到的抗性芽接种至无毒素的芽分化培养基上，使抗性芽恢复生长；（7）将得到的抗性芽接种至无激素的MS基本培养基上诱导生根，使其继续长成具有根、茎、叶的完整再生植株；（8）用SSR和SRAP标记对抗性植株进行分子标记鉴定。