[发明专利]一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法。该方法是利用超声辅助提取并辅以纤维素酶和果胶酶的处理来破坏茶叶细胞的细胞壁，使活性物质更大限度地溶出，并采用碱法提取以得到茶叶中的酸性蛋白，再用等电点沉淀的方法分离出茶蛋白；再对提取得到的茶蛋白进行酶解，从而再次提高了茶蛋白的性能。由于超声技术和复合酶处理破坏了细胞的细胞壁，对其内的活性物质的结构也有一定程度的影响，所以本方法得到的茶蛋白样品得率较高；再经酶解处理之后，蛋白的溶解性、抗氧化活性又有了明显的提高，因此本方法具有资源利用率高、节约能源、活性增强等优点。

主权项

一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法，其特征在于：所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法包括按顺序进行的下列步骤：1)复合酶法预处理：将粗老茶加入到适量蒸馏水中至其全部浸没在蒸馏水中，用稀盐酸调节pH至4，然后加入占粗老茶总量0.5％～1.5％重量的由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，在40℃的温度下反应1～3小时，反应结束后在100℃的温度下灭活5min；2)超声碱法提取：在上述反应液中加入碱液，所述粗老绿茶与碱液的重量比为1∶20～1∶40，碱选自氢氧化钠或氢氧化钾中的一种，碱液浓度为0.1M～0.2M，然后在超声清洗仪中搅拌提取1～2小时，之后减压过滤，收集滤液而得到含有茶蛋白的茶叶供试液；3)等电点沉淀：向上述茶叶供试液中加入浓盐酸，以将溶液pH调至4.5，然后在4℃的温度下静置24～48小时；4)离心分离：利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15～20分钟，收集沉淀物；5)冷冻干燥：将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中，然后置于‑18℃的温度下进行冷冻，冻实之后置于‑50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到茶蛋白样品；6)木瓜蛋白酶酶解：将上述冷冻干燥后的茶蛋白样品加入到pH为6～7的PBS缓冲溶液中，之后加入木瓜蛋白酶，其中木瓜蛋白酶的用量占茶蛋白样品重量0.5～1.5％，在55～65℃的温度下反应1～3小时，反应结束后在100℃的温度下灭活5min；7)等电点重新沉淀：向上述酶解后的反应液中加入浓盐酸，以将溶液pH调至4.5，然后在4℃的温度下静置24～48小时；8)离心或过滤分离：利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15～20分 钟，收集沉淀物；9)冷冻干燥：将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中，然后置于‑18℃的温度下进行冷冻，冻实之后置于‑50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到所述的茶蛋白。